基于qRT-PCR終點法的FMDV快速中和試驗的建立.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、口蹄疫(FMD)是由微RNA病毒科口蹄疫病毒屬的口蹄疫病毒(FMDV)引起的一種急性、烈性傳染病。病毒中和試驗(VNT)作為一項重要的檢測方法,在FMDV中和抗體檢測,疫苗毒株的選擇中起著非常重要的作用。為縮短VNT檢測時間,減少結(jié)果判斷時人為因素的影響,本論文將實時熒光定量RT-PCR(qRT-PCR)方法應(yīng)用于VNT結(jié)果的判斷,建立了基于qRT-PCR終點法的FMDV快速中和試驗(qRT-PCR-VNT)。首先建立基于FMDV3D基

2、因的Taqman探針qRT-PCR方法,其敏感性為53.4拷貝/μL,之后使用該方法,定量分析FMDV Asia-1/JSL/06毒株在IBRS-2細胞中的復(fù)制過程,建立FMDV Asia-1毒株在IBRS-2細胞中的復(fù)制曲線,確定感染后20 h為病毒復(fù)制的終點時間,即在該時間點,終止VNT,收集細胞,提取RNA,利用qRT-PCR方法定量檢測病毒RNA含量。根據(jù)病毒RNA拷貝數(shù),判斷血清中和FMDV的能力,基于FMDV陰性血清,確定q

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