恩再適對創(chuàng)傷性大鼠腦保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:顱腦創(chuàng)傷占全身創(chuàng)傷發(fā)生率的第2位,但其致殘率、死亡率處于第1位。在中國每年大約有60萬人發(fā)生顱腦創(chuàng)傷,其中10萬人左右死亡。隨著現(xiàn)代化交通的發(fā)展,車禍將有增無減,提高創(chuàng)傷性顱腦損傷的治愈率是醫(yī)學(xué)界的責(zé)任。
　　 恩再適(牛痘疫苗致炎兔皮提取物注射液)是通過牛痘疫苗免疫家兔后進(jìn)行分離得到的一種非蛋白物質(zhì),臨床已用于鎮(zhèn)痛和腦梗塞。最近有研究顯示,牛痘疫苗致炎兔皮提取物注射液具有保護(hù)缺氧狀態(tài)下神經(jīng)元,促進(jìn)神經(jīng)軸突生長,抑制炎癥介

2、質(zhì)緩激肽釋放從而緩解腦組織水腫等神經(jīng)保護(hù)作用。本實(shí)驗(yàn)旨在探討恩再適對大鼠創(chuàng)傷性顱腦損傷(traumatic braininjury,TBI)的腦保護(hù)作用,為臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。
　　 方法:
　　 1 分組及模型制備
　　 取SD雄性大鼠50只,隨機(jī)分為假損傷組、單純損傷組、恩再適小劑量組(5u/kg)、中劑量組(10u/kg)、高劑量組(20u/kg),每組10只。將大鼠麻醉后,在左側(cè)顱骨表面用牙科鉆鉆鉆一直

3、徑約4.5mm的孔,去除骨窗后,由液壓打擊器(HS-061型)調(diào)整相同打擊力,造成沖擊性腦損傷。而假損傷組動(dòng)物只進(jìn)行去骨窗而不進(jìn)行打擊。恩再適各組致傷后立即從尾靜脈按組別、體重注射相應(yīng)劑量的恩再適,假損傷組、單純損傷組注射5ml生理鹽水。
　　 2 神經(jīng)行為評分
　　 于手術(shù)麻醉清醒后觀察動(dòng)物行為障礙程度并進(jìn)行評分,評分標(biāo)準(zhǔn)參照Bederson等的方法。
　　 3 腦含水量及血腦屏障通透率
　　 取各組中

4、6只大鼠,于手術(shù)后22h,經(jīng)尾靜脈注射2％伊文氏藍(lán)(evansblue,EB)生理鹽水液(3ml/kg)。循環(huán)2h后,將大鼠迅速斷頭取腦,用干濕重法測腦組織含水率,采用紫外分光光度儀在λ=620nm處比色,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得出腦組織中EB的含量,以每克濕重腦組織內(nèi)所含EB的量(μg/g)表示。
　　 4 尼氏染色
　　 各組中剩余4只大鼠于手術(shù)后72h,4％多聚甲醛灌注后取腦,石蠟包埋、切片、尼氏染色后觀察。
　　

5、5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
　　 使用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)分析軟件對大鼠神經(jīng)行為障礙評分、大鼠腦含水量進(jìn)行單因素方差分析,對大鼠血腦屏障通透率進(jìn)行非參數(shù)秩和檢驗(yàn)。P＜0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果:
　　 1 神經(jīng)行為評分結(jié)果:單純損傷組、恩再適小劑量組、中劑量組、高劑量組的神經(jīng)行為障礙評分分別為(8.4±1.3)分、(7.1±1.2)分、(6.7±1.3)分、(5.4±1.0)分;恩再適治療組與單純損傷組相比,評分明顯

6、降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);恩再適高劑量組與恩再適中、小劑量組相比,評分降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);恩再適中劑量組與恩再適小劑量組相比,評分有降低趨勢,但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 2 腦含水量和血腦屏障通透率的改變:單純損傷組、假損傷組、恩再適小劑量組、中劑量組、高劑量組的腦含水量分別為(84.23±1.52)％、(77.54±0.53)％、(81.13±1.03)％、(79.47±0.7

7、7)％、(78.53±0.76)％,血腦屏障通透率分別為(44.83±3.27)μg/g、(12.80±1.46)μg/g、(36.27±3.10)μg/g、(31.42±2.94)μg/g、(26.80±2.24)μg/g;與假損傷組相比,恩再適小、中、高劑量組和單純損傷組大鼠的腦含水量、血腦屏障通透率均有不同程度的增高;與單純損傷組比較,恩再適治療組均可使腦含水量、血腦屏障通透率不同程度的降低,差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);觀

8、測數(shù)據(jù)與恩再適存在量效關(guān)系。
　　 3 形態(tài)學(xué)觀察
　　 3.1大體觀察:大鼠液壓沖擊致傷后三天取腦時(shí),假損傷組腦表面基本正常,單純損傷組可出現(xiàn)明顯腦挫裂傷灶及硬膜下血腫,恩再適小、中劑量組腦表面的挫傷灶范圍及硬膜下血腫量有所減小,并且恩再適高劑量組腦表面挫裂傷已不明顯。
　　 3.2尼氏染色:觀察可見,假損傷組海馬組織的神經(jīng)細(xì)胞排列整齊、形態(tài)完整,細(xì)胞核大而圓,核仁明顯,尼氏小體數(shù)量多;單純損傷組致傷側(cè)的海馬組

9、織神經(jīng)細(xì)胞減少,同時(shí)出現(xiàn)了神經(jīng)細(xì)胞變性的特征,如細(xì)胞核溶解、核碎裂、核固縮、尼氏小體消失等,以海馬的CA1區(qū)及CA2區(qū)多見。恩再適治療組與單純損傷組相比,致傷側(cè)海馬組織神經(jīng)細(xì)胞排列比較整齊,細(xì)胞核飽滿,核仁較清晰,僅有少量散在的胞核固縮,且尼氏小體數(shù)量增多。
　　 結(jié)論:
　　 1 恩再適能顯著改善TBI后大鼠神經(jīng)行為障礙,降低TBI后腦水腫程度,抑制血腦屏障的破壞,且可保護(hù)神經(jīng)元細(xì)胞,證明其對于TBI具有一定的治療作用