三華李果實發(fā)育轉(zhuǎn)錄組分析及其花青苷生物合成相關(guān)基因表達(dá)分析.pdf

1、中國李（Prunus salicinaLindl.）原產(chǎn)長江流域，經(jīng)長期栽培已在華南地區(qū)形成了一個獨特的南亞熱帶栽培群體，并成為廣東省第一大落葉果樹，主要有三華李類（紅皮紅肉）、綠皮白肉類（竹絲李、紅線李等）和紅皮白肉類（三月李等）等三種類型，其中三華李類品種栽培面積約占廣東全省李面積80％以上。本研究以三華李類品種‘華蜜大蜜李’和‘白脆雞麻李’為材料，通過 RNA-Seq技術(shù)進行果實、花、嫩莖葉和胚等進行轉(zhuǎn)錄組測序，初步建立起三華李果

2、實發(fā)育轉(zhuǎn)錄數(shù)據(jù)庫，挖掘果實發(fā)育成熟過程中差異表達(dá)基因，分析果實發(fā)育成熟過程中花青苷生物合成、果實成熟軟化相關(guān)的細(xì)胞壁代謝等差異表達(dá)基因，為今后果實著色改良、耐儲運品種培育提供參考依據(jù)。主要研究結(jié)果如下：
　　1、以華蜜李大蜜李的葉芽、花朵、胚和不同發(fā)育時期的果實(花后75 d、花后100 d、花后130 d)為材料建立三華李開花結(jié)果時期轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)庫，獲得68,484條Unigene；并對其進行GO、KEGG、NR、PlnTFDB等

3、數(shù)據(jù)庫注釋，共有33,630條Unigene獲得注釋；并對1 kb以上的Unigene進行SSR位點開發(fā)，共發(fā)現(xiàn)7,984個SSR位點。
　　2、基于4個不同發(fā)育時期的華蜜大蜜李果實樣品轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)進行差異表達(dá)基因的篩選，共獲得5,394個差異表達(dá)基因。對差異表達(dá)基因進行轉(zhuǎn)錄因子預(yù)測、KEGG、表達(dá)模式GO富集分析發(fā)現(xiàn)一些時期高表達(dá)基因模塊；蛋白互作網(wǎng)絡(luò)分析發(fā)現(xiàn)果實發(fā)育成熟過程中的一些高蛋白互作集中模塊。對果實發(fā)育差異表達(dá)基因預(yù)測分

4、析，發(fā)現(xiàn)大部分激素相關(guān)基因呈下調(diào)表達(dá)趨勢，并發(fā)現(xiàn)30個激素合成相關(guān)基因。對細(xì)胞壁代謝相關(guān)差異基因分析，發(fā)現(xiàn)41個細(xì)胞壁代謝相關(guān)基因；其中1個華蜜李幼果期（花后75 d）特異表達(dá)、2個華蜜李成熟果（花后130 d）時期特異表達(dá)基因。
　　3、對三華李果實花青苷合成相關(guān)基因進行分析，發(fā)現(xiàn)41個可能花青苷生物合成關(guān)鍵基因、26個可能參與花青苷轉(zhuǎn)運、39個可能花青苷合成相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子、3個果實色素積累而下調(diào)的基因。
　　4、以特異引物

5、擴增條帶單一、溶解曲線峰值高、最高峰值溫度波動小為標(biāo)準(zhǔn)進行篩選內(nèi)參基因，篩選結(jié)果表明HMBS2為華蜜大蜜李果實的基因表達(dá)量分析較合適的qRT-PCR內(nèi)參基因。通過對10個候選花青苷生物合成基因、9個候選MYB轉(zhuǎn)錄因子進行qRT-PCR驗證表明，相比華蜜大蜜李葉和花，華蜜大蜜李成熟果（花后130 d）果實顏色深可能是受c23975.graph_c0（ANS）和c19863.graph_c0（UFGT）表達(dá)的影響；與白脆雞麻李成熟果（花后1