HWTX-Ⅰ對(duì)全腦缺血大鼠腦組織自由基及海馬神經(jīng)元損傷的保護(hù)作用研究.pdf

1、目的：觀察虎紋捕鳥蛛毒素-I(HWTX-I)對(duì)全腦缺血再灌注損傷大鼠腦組織SOD、CAT活力及MDA濃度變化、大鼠海馬CA1區(qū)錐體細(xì)胞Nissl染色形態(tài)學(xué)變化、CA1區(qū)錐體細(xì)胞胞內(nèi)線粒體形態(tài)變化、海馬組織Bax和bcl-2等凋亡相關(guān)因子蛋白及mRNA表達(dá)的影響，探討其改善全腦缺血再灌注損傷的機(jī)制，為顱腦損傷新的臨床治療手段提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 研究方法：成年雄性SD大鼠88只，大鼠隨機(jī)分為5組：假手術(shù)組(n=24)、生理鹽水組(n=2

2、4)、HWTX-I0.5μg/kg組(n=8)、HWTX-I1.0μg/kg組(n=24)、HWTX-I2.0μg/kg組(n=8)。其中每組大鼠8只用于檢測(cè)腦組織SOD、CAT活力及MDA含量變化；假手術(shù)組、生理鹽水組、HWTX-I1.0μg/kg組每組8只用于觀察海馬CA1區(qū)錐體細(xì)胞Nissl染色形態(tài)學(xué)變化、Bax和bcl-2等凋亡相關(guān)因子蛋白表達(dá)水平的影響，另每組8只用于觀察海馬神經(jīng)細(xì)胞胞內(nèi)線粒體形態(tài)學(xué)變化、Bax和bcl-2等凋

3、亡相關(guān)因子mRNA表達(dá)水平的影響。所有大鼠(假手術(shù)組除外)經(jīng)四血管阻斷全腦缺血結(jié)合蛛網(wǎng)膜下腔置管術(shù)經(jīng)適當(dāng)改進(jìn)后應(yīng)用于本研究。 研究結(jié)果：(1)與生理鹽水組比較，三組用藥組大鼠腦組織勻漿SOD活力隨著單位劑量的增加隨之升高，組間比較差異無顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2.與生理鹽水組比較，三組用藥組大鼠腦組織勻漿MDA含量隨著單位劑量的增加隨之降低，生理鹽水組與2.0μg/kg組比較差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。3.與生理鹽水組比較，

4、三組用藥組大鼠腦組織勻漿CAT活力隨著單位劑量的增加隨之升高，生理鹽水組與2.0μg/kg組比較差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。 (2)通過Nissl染色光鏡下觀察到假手術(shù)組SD大鼠海馬CA1區(qū)可見數(shù)層錐體神經(jīng)元，排列整齊緊密；而HWTX-I1.0μg/kg組海馬錐體細(xì)胞則略為疏散分布；生理鹽水組海馬錐體細(xì)胞排列散亂，層次不完整，呈稀疏分布。 (3)電鏡下觀察到假手術(shù)組海馬錐體細(xì)胞線粒體嵴清晰可見，未見線粒體嵴斷

5、裂現(xiàn)象；HWTX-I1.0μg/kg組也未見明顯線粒體嵴斷裂現(xiàn)象；而生理鹽水組則可見線粒體嵴模糊不清，出現(xiàn)空泡化現(xiàn)象。 (4)應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色法觀察到假手術(shù)組海馬CA1區(qū)幾乎未見Bax陽性細(xì)胞表達(dá)；HWTX-I1.0μg/kg組海馬CA1區(qū)可見Bax陽性細(xì)胞表達(dá)，陽性細(xì)胞稀疏分布；而生理鹽水組海馬CA1區(qū)可見Bax陽性細(xì)胞表達(dá)，且陽性細(xì)胞呈集中密集分布。 (5)應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色法觀察到假手術(shù)組海馬CA1區(qū)僅有少量

6、bcl-2陽性細(xì)胞表達(dá)；生理鹽水組海馬CA1區(qū)可見bcl-2陽性細(xì)胞表達(dá)，陽性細(xì)胞稀疏分布；而HWTX-I1.0μg/kg組海馬CA1區(qū)可見bcl--2陽性細(xì)胞表達(dá)，且陽性細(xì)胞呈集中密集分布。 (6)RT-PCR法檢測(cè)到HWTX-I1.0μg/kg組大鼠海馬組織BaxmRNA的表達(dá)較生理鹽水組低，兩組比較雖無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但HWTX-I1.0μg/kg組BaxmRNA的表達(dá)較生理鹽水組呈下降趨勢(shì)。 (7)RT-PCR法檢測(cè)

7、到HWTX-I1.0μg/kg組大鼠海馬組織bcl-2mRNA的表達(dá)較生理鹽水組高，HWTX-I1.0μg/kg組與生理鹽水組比較雖無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但HWTX-I1.0μg/kg組bcl-2mRNA的表達(dá)較生理鹽水組呈上升趨勢(shì)。 結(jié)論：1.HWTX-I蛛網(wǎng)膜下腔用藥可以明顯減輕缺血性腦損傷對(duì)大鼠腦組織勻漿自由基損傷的影響。 2.HWTX-I蛛網(wǎng)膜下腔用藥能夠使全腦缺血大鼠海馬神經(jīng)細(xì)胞線粒體基本維持正常形態(tài)，穩(wěn)定大鼠全腦缺血