二烯丙基二硫體內(nèi)外抑制人結(jié)腸癌SW480細(xì)胞增殖及機(jī)制研究.pdf

1、第一部分：DADS體外對(duì)人結(jié)腸癌SW480細(xì)胞　　生長(zhǎng)抑制作用的研究目的：研究二烯丙基二硫(DADS)體外抑制人結(jié)腸癌SW480細(xì)胞增殖并探討其作用機(jī)理。方法：采用MTT、細(xì)胞計(jì)數(shù)、細(xì)胞活力檢測(cè)，觀察DADS對(duì)人結(jié)腸癌SW480細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用；光鏡和電鏡觀察DADS對(duì)SW480細(xì)胞形態(tài)的影響；流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)DADS對(duì)SW480細(xì)胞周期分布的影響；免疫細(xì)胞化學(xué)圖像定量分析檢測(cè)細(xì)胞PCNA、p53、p21WAF1、Bcl-2及Bax蛋

2、白表達(dá)的變化。結(jié)果：不同濃度DADS(30μg/ml、40μg/ml、50μg/ml、60μg/ml、70μg/m1)對(duì)SW480細(xì)胞(24h、48h、72h、96h)具有明顯的生長(zhǎng)抑制效應(yīng)，并呈劑量-效應(yīng)和時(shí)間-效應(yīng)依賴關(guān)系(P＜0.05)；DADS濃度從30μg/ml增加到70μg/ml時(shí)，細(xì)胞群體倍增時(shí)間由34.50h延長(zhǎng)至94.74h(P＜0.05)；細(xì)胞活力檢測(cè)結(jié)果顯示，對(duì)照組與DADS各濃度處理組細(xì)胞存活率差異無(wú)顯著性(P＞

3、0.05)；光鏡、電鏡結(jié)果顯示，與對(duì)照組比較，處理組瘤細(xì)胞稀疏，數(shù)量明顯減少，細(xì)胞異型性變小，形態(tài)較為一致，細(xì)胞以圓形為主，細(xì)胞小，胞漿較豐富，核變小，大小較為一致，核漿比例變小，核仁不明顯，胞漿內(nèi)細(xì)胞器豐富，可見(jiàn)粘液空泡，胞核及部分細(xì)胞器呈退行性變，部分瘤細(xì)胞核固縮，深染，染色質(zhì)成塊聚集，呈凋亡形態(tài)學(xué)改變；SW480細(xì)胞隨DADS處理濃度的增加和處理時(shí)間的延長(zhǎng)，G0/G1期細(xì)胞含量逐漸減少，G2/M期細(xì)胞含量逐漸增加，并出現(xiàn)較高的亞二

4、倍體峰(P＜0.05)；免疫細(xì)胞化學(xué)圖像定量分析結(jié)果顯示，50μg/mlDADS處理SW480細(xì)胞48h后，p53、PCNA、Bcl-2蛋白表達(dá)減弱，p21WAF1、Bax蛋白表達(dá)增強(qiáng)，與對(duì)照組比較，差異有顯著性意義(P＜0.05)。結(jié)論：1.DADS對(duì)體外培養(yǎng)的SW480細(xì)胞具有明顯的增殖抑制作用。2.DADS能使SW480細(xì)胞阻滯在G2/M期，并具有誘導(dǎo)其凋亡的作用。3.DADS可能通過(guò)p53、PCNA、Bcl-2蛋白表達(dá)下調(diào)，p2

5、1WAF1、Bax蛋白表達(dá)上調(diào)，阻滯癌細(xì)胞于G2/M期，抑制SW480細(xì)胞增殖?！　〉诙糠郑篋ADS對(duì)裸鼠體內(nèi)人結(jié)腸癌SW480細(xì)胞抑制增殖的實(shí)驗(yàn)性研究 目的：通過(guò)建立人結(jié)腸癌SW480細(xì)胞裸鼠移植瘤模型，研究DADS對(duì)裸鼠體內(nèi)人結(jié)腸癌SW480細(xì)胞增殖，DADS體外處理后SW480細(xì)胞致瘤性的影響及DADS對(duì)結(jié)腸癌裸鼠移植瘤的預(yù)防和治療作用，并初步探討其作用機(jī)理。方法：建立人結(jié)腸癌SW480細(xì)胞裸鼠移植瘤模型，20只實(shí)驗(yàn)裸

6、鼠分為四組，即對(duì)照組、治療組、預(yù)防組和體外處理組。體外處理組接種50μg/mlDADS處理48h后的SW480細(xì)胞，對(duì)照組、治療組、預(yù)防組移植未處理的SW480細(xì)胞。預(yù)防組移植后次日起隔日腹腔注射給藥，治療組成瘤后隔日腹腔給藥，對(duì)照組成瘤后隔日腹腔注射生理鹽水。測(cè)裸鼠體重和移植瘤體積，觀察移植瘤生長(zhǎng)情況。處死后，稱(chēng)瘤重、測(cè)體積，計(jì)算抑瘤率；光鏡、電鏡觀察移植瘤形態(tài)變化；流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)移植瘤細(xì)胞周期分布；免疫組織化學(xué)圖像定量分析檢測(cè)細(xì)胞P

7、CNA、p53、p21WAF1、Bcl-2及Bax蛋白表達(dá)的變化。結(jié)果：成功的建立了人結(jié)腸癌SW480細(xì)胞裸鼠移植瘤模型。對(duì)照組成瘤率100％，平均瘤重4.071g，人結(jié)腸癌SW480細(xì)胞經(jīng)DADS體外處理后，其致瘤性明顯降低，成瘤率40％，平均瘤重0.503g，瘤重抑瘤率87.64％，與對(duì)照組差異有顯著性意義(P＜0.05)；DADS在體內(nèi)對(duì)人結(jié)腸癌的發(fā)生具有預(yù)防作用，成瘤率為60％，平均瘤重0.776g，抑瘤率80.94％，與對(duì)照組

8、差異有顯著性意義(P＜0.05)；治療組平均瘤重1.512g，抑瘤率62.86％，與對(duì)照組差異有顯著性意義(P＜0.05)；與對(duì)照組相比，各處理組移植瘤細(xì)胞異型性降低，癌巢較清楚，可見(jiàn)腺樣結(jié)構(gòu)，癌細(xì)胞大小較均勻，胞漿內(nèi)細(xì)胞器豐富，核形狀較規(guī)則，核質(zhì)比下降，核分裂相減少，部分癌細(xì)胞核固縮，膜結(jié)構(gòu)仍完整，呈凋亡早期改變，可見(jiàn)典型凋亡小體形成。移植瘤細(xì)胞周期阻滯在G2/M期，并且出現(xiàn)較高的亞二倍體峰(P＜0.05)，各處理組之間差異無(wú)顯著性；

9、免疫組織化學(xué)與圖像定量分析結(jié)果顯示，各處理組與對(duì)照組比較，裸鼠移植瘤組織p53、PCNA、Bcl-2蛋白表達(dá)減弱，而p21WAF1、Bax蛋白表達(dá)增強(qiáng)，與對(duì)照組差異有顯著性意義(P＜0.05)。DADS處理組裸鼠的體重、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、尿素氮、肌酐與對(duì)照組相比，差異均無(wú)顯著性意義(P＞0.05)，肝臟、肺臟、腎臟、骨髓與正常組織的形態(tài)結(jié)構(gòu)較一致，均無(wú)明顯的病理變化，表明DADS對(duì)裸鼠無(wú)明顯的毒副作用。結(jié)論：1.DADS可明顯降低