中華獼猴桃根乙酸乙酯提取部分對(duì)結(jié)腸癌SW480細(xì)胞增殖作用的影響及機(jī)制研究.pdf

1、目的：探討中華獼猴桃根乙酸乙酯提取部分(Actinidiachinensis planch extracted by ethyl acetate，EE-ACP)對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞SW480的增殖抑制及凋亡誘導(dǎo)作用，并研究其可能的機(jī)制。
　　方法：實(shí)驗(yàn)采用人結(jié)腸癌細(xì)胞株SW480，中華獼猴桃乙酸乙酯提取物實(shí)驗(yàn)組分為80μg·mL-1、160μg·mL-1、320μg·mL-1三個(gè)劑量組，分別作用48h后進(jìn)行相關(guān)檢測(cè)。運(yùn)用MTT法檢測(cè)EE-

2、ACP對(duì)SW480增殖抑制作用以及IC50；Hoechst33258熒光染色法觀察EE-ACP作用于SW480發(fā)生凋亡時(shí)細(xì)胞形態(tài)的變化；FITC-Annexin V-PI雙染流式細(xì)胞儀檢測(cè)EE-ACP作用于SW480后的細(xì)胞凋亡率的改變；PI染色流式細(xì)胞儀檢測(cè)EE-ACP對(duì)SW480周期的影響；RT-PCR技術(shù)檢測(cè)周期相關(guān)基因P53、P21、CyclinD1在轉(zhuǎn)錄水平的改變； Western-blot檢測(cè)凋亡相關(guān)基因caspase3、c

3、aspase7、Fas及周期相關(guān)基因P53、P21、CyclinD1在蛋白水平上的差異表達(dá)。
　　結(jié)果：EE-ACP具有抑制 SW480細(xì)胞增殖的作用，且呈劑量依賴性和時(shí)間依賴性，作用48h后SW480細(xì)胞的IC50為195.38μg·mL-1；Hoechst33258熒光染色法觀察 SW480細(xì)胞核有明顯的凋亡形態(tài)學(xué)變化；FITC-Annexin V/PI雙染法發(fā)現(xiàn)EE-ACP能誘導(dǎo)SW480細(xì)胞凋亡，且隨著劑量的增加其誘導(dǎo)凋亡

4、的能力也增強(qiáng)；PI染色法說明EE-ACP具有細(xì)胞周期阻滯的作用，可以將SW480細(xì)胞阻滯于G1期；RT-PCR檢測(cè)提示EE-ACP可轉(zhuǎn)錄上調(diào)周期相關(guān)基因P53和P21的表達(dá)，同時(shí)下調(diào)CyclinD1的表達(dá)；我們進(jìn)而在蛋白水平加以驗(yàn)證，結(jié)果也提示 EE-ACP可上調(diào)周期相關(guān)蛋白P53和P21的表達(dá)以及凋亡相關(guān)蛋白caspase-3、caspase-7及Fas的表達(dá)。
　　結(jié)論：中華獼猴桃根乙酸乙酯提取物具有明顯的抗腫瘤作用。機(jī)制主要