中華獼猴桃根總?cè)瓶鼓[瘤細(xì)胞增殖和腸癌細(xì)胞侵襲及轉(zhuǎn)移研究.pdf

1、目的：優(yōu)化大孔吸附樹脂對野生中華獼猴桃根總?cè)疲╰t-RAC）的提取工藝，并進(jìn)一步探究總?cè)茖Χ喾N腫瘤細(xì)胞的增殖抑制作用和腸癌細(xì)胞LOVO的侵襲和轉(zhuǎn)移抑制作用。
　　方法：用75％乙醇浸泡樣品粉末，分別以40%，50%，60%，70%，80%及95%乙醇為有機(jī)溶劑，以中華獼猴桃根總?cè)瓢俜趾繛橹笜?biāo)，確定 AB-8型大孔吸附樹脂對總?cè)频奶崛」に嚄l件；選取中華獼猴桃根總?cè)瓢俜趾孔罡呓M作為后續(xù)實(shí)驗(yàn)樣品，采用細(xì)胞增殖與活性檢測試驗(yàn)

2、（CCK-8法）檢測不同濃度（25，50，100，200，400 ug/ml）野生中華獼猴桃根總?cè)疲╰t-RAC）對人腸癌SW480細(xì)胞、LOVO細(xì)胞，人乳腺癌MCF-7細(xì)胞及人肝癌SMMC-7721細(xì)胞的增殖作用，并計(jì)算tt-RAC作用于不同細(xì)胞的半數(shù)抑制濃度（IC50）；采用流式細(xì)胞術(shù)（FCM）分析其對腸癌SW480細(xì)胞周期分布的影響；采用劃痕實(shí)驗(yàn)觀察 tt-RAC對LOVO細(xì)胞遷移影響，以劃痕兩側(cè)細(xì)胞向中心遷移的距離為指標(biāo)；并進(jìn)

3、一步用transwell小室試驗(yàn)觀察tt-RAC對LOVO細(xì)胞穿透能力的影響，以判斷對腫瘤細(xì)胞侵襲運(yùn)動(dòng)的作用；最后，運(yùn)用Western Blotting（WB）實(shí)驗(yàn)檢測上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（ epithelial-to-mesenchymal transition， EMT）相關(guān)基因E-cadherin、N-cadherin和vimentin在蛋白水平上的表達(dá)差異。
　　結(jié)果：AB-8大孔吸附樹脂提取中華獼猴桃根總?cè)频淖罴压に嚄l件為：

4、中華獼猴桃根上樣液濃度為2.8mg/ml，PH值為7，上樣流速為1BV/h；洗脫體積為4倍樹脂柱床體積（4BV），洗脫流速為2BV/h。經(jīng)40%乙醇洗脫提取的中華獼猴桃根總?cè)频陌俜趾孔罡邽?5.89%。因此，選取40%乙醇提取的中華獼猴桃根總?cè)疲╰t-RAC）做后續(xù)實(shí)驗(yàn)，其對四種腫瘤細(xì)胞增殖均有抑制作用并呈濃度和時(shí)間依賴性；其中對SW480細(xì)胞的抑制作用最強(qiáng)，其機(jī)制可能是通過誘導(dǎo)SW480細(xì)胞發(fā)生S和G2期阻滯引起的。在劃痕試驗(yàn)中

5、，將藥物濃度低于IC50的tt-RAC作用于LOVO細(xì)胞結(jié)果顯示，低濃度tt-RAC可抑制劃痕兩側(cè)LOVO細(xì)胞向劃痕中心遷移。Transwell實(shí)驗(yàn)同樣顯示低濃度tt-RAC抑制上室細(xì)胞向下室侵襲，隨濃度增高侵入下室細(xì)胞數(shù)量逐漸減少，呈濃度依賴性。WB實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示tt-RAC抑制LOVO細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移作用可能是通過上調(diào)E-cadherin蛋白表達(dá)水平及下調(diào)N-cadherin和vimentin蛋白表達(dá)水平實(shí)現(xiàn)的。
　　結(jié)論：以乙醇

6、作為有機(jī)溶劑，使用AB-8大孔吸附樹脂對中華獼猴桃根總?cè)七M(jìn)行提取，該工藝具有成本低、安全穩(wěn)定、操作簡單和取得率高等優(yōu)勢；且所得tt-RAC對人腸癌SW480細(xì)胞、LOVO細(xì)胞，人乳腺癌MCF-7細(xì)胞及人肝癌SMMC-7721細(xì)胞都具有細(xì)胞毒作用，其機(jī)制可能是通過誘導(dǎo)細(xì)胞周期發(fā)生S和G2期阻滯；tt-RAC亦可抑制腫瘤細(xì)胞侵襲和遷移，抑制上皮細(xì)胞向間質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化，可能的機(jī)制是與E-cadherin蛋白表達(dá)水平上調(diào)及N-cadherin和v