人腫瘤壞死因子α聯(lián)合溴隱亭逆轉(zhuǎn)肝細(xì)胞肝癌多藥耐藥性體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、肝癌(Hepatocellularcarcinoma，HCC)是人體最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一。以手術(shù)為主的個(gè)體化綜合治療已成為目前肝癌治療的規(guī)范化治療方案?；熥鳛楦伟┮豁?xiàng)重要的輔助治療手段在臨床仍占據(jù)重要的地位，但多藥耐藥現(xiàn)象的產(chǎn)生卻是制約著化療效果的重要因素之一。 近年來(lái)，尋找更加有效的基因治療手段和高效、低毒的藥物治療肝癌的耐藥問(wèn)題仍是學(xué)者們研究的熱點(diǎn)課題之一。因?yàn)槿魏螁我坏氖侄文孓D(zhuǎn)肝癌的多藥耐藥現(xiàn)象面對(duì)復(fù)雜的耐藥機(jī)制均不能達(dá)

2、到理想的治療效果，聯(lián)合兩種有效的方法更有可能達(dá)到顯著增強(qiáng)化療藥物毒效的目的。研究發(fā)現(xiàn)利用基因工程技術(shù)將細(xì)胞因子基因轉(zhuǎn)染腫瘤細(xì)胞，可克服其全身應(yīng)用的副反應(yīng)，且細(xì)胞因子釋放到腫瘤周圍可增加其刺激機(jī)體免疫機(jī)能的抗腫瘤作用，并且可改變腫瘤細(xì)胞對(duì)其它治療方法如化療的敏感性。人腫瘤壞死因子(hTNF-α)是迄今為止所發(fā)現(xiàn)的抗腫瘤活性最強(qiáng)的細(xì)胞因子之一。另有學(xué)者發(fā)現(xiàn)溴隱亭有抑制ATP酶的活性從而抑制P-gp的藥物外泵功能。溴隱亭是一種D2多巴胺受體拮

3、抗劑，臨床上主要用于治療巴金森氏綜合征和肢端肥大癥，由于其毒副作用少而易于被患者接受。本實(shí)驗(yàn)即是聯(lián)合人腫瘤壞死因子(hTNF-α)和溴隱亭對(duì)肝癌耐藥性的治療進(jìn)行了系統(tǒng)的體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)研究，共分以下四部分。 第一部分真核表達(dá)載體pBK-hTNFα的構(gòu)建及其在人肝癌耐藥細(xì)胞株HepG2/ADM中的穩(wěn)定表達(dá) 目的：構(gòu)建可在真核細(xì)胞內(nèi)表達(dá)人腫瘤壞死因子alpha(hTNF-α)基因的真核表達(dá)載體。經(jīng)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染人肝癌耐藥細(xì)胞株HepG

4、2/ADM，建立穩(wěn)定表達(dá)hTNF-α基因的細(xì)胞模型，為基因治療奠定基礎(chǔ)。 結(jié)論：通過(guò)DNA重組技術(shù)成功地構(gòu)建了可在體外穩(wěn)定表達(dá)hTNF-αcDNA全長(zhǎng)的真核表達(dá)載體pBK-hTNFα。 第二部分人腫瘤壞死因子α聯(lián)合溴隱亭對(duì)肝癌耐藥細(xì)胞株化療敏感性的研究 目的：研究溴隱亭(Bromocriptine，BCT)聯(lián)合人TNF-α基因(humantumornecrosisfactor-α，hTNFα)處理人肝癌耐藥細(xì)胞株

5、HepG2/ADM對(duì)化療敏感性的影響。 結(jié)論：溴隱亭和hTNFα通過(guò)不同的機(jī)制逆轉(zhuǎn)腫瘤的多藥耐藥性，兩者聯(lián)合明顯加強(qiáng)抗腫瘤藥物對(duì)細(xì)胞的毒力。 第三部分B超引導(dǎo)下裸鼠原位肝細(xì)胞癌多藥耐藥模型的建立 目的：B超引導(dǎo)下建立裸鼠原位肝癌多藥耐藥模型。 結(jié)論：成功在B超引導(dǎo)下建立肝癌多藥耐藥動(dòng)物模型為研究肝癌多藥耐藥逆轉(zhuǎn)提供動(dòng)物平臺(tái)。 第四部分人腫瘤壞死因子-α聯(lián)合溴隱亭對(duì)人肝癌裸鼠耐藥模型耐藥性逆轉(zhuǎn)的研