高能電子射線對(duì)L929成纖維細(xì)胞的影響以及PQQ（吡咯并喹啉醌）對(duì)大鼠皮膚急性放射性燒傷的治療作用的初步研究.pdf

1、目的：高能電子射線模擬β射線照射L929成纖維細(xì)胞和大鼠皮膚后，觀察細(xì)胞生長(zhǎng)增殖和細(xì)胞凋亡，探討β放射損傷的細(xì)胞機(jī)制；應(yīng)用PQQ，觀察其對(duì)大鼠皮膚急性放射性燒傷的治療作用。 方法： ①以10Gy照射劑量的高能電子射線模擬β射線照射L929細(xì)胞，采用MTT實(shí)驗(yàn)觀察輻照后細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線，細(xì)胞同步化后，應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)觀察輻照后細(xì)胞在不同時(shí)間點(diǎn)(4h、8h、12h、24h、36h、48h)的細(xì)胞周期分布和細(xì)胞凋亡率，應(yīng)用半定量P

2、CR(RT-PCR)、瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行凋亡指標(biāo)(Caspase-3)的檢測(cè)。 ②45Gy劑量照射SD大鼠臀部皮膚后，分別以噴射、口服給藥途徑使用新型維生素PQQ，使用劑量分別是300mmol／L、2mg／kg體重，應(yīng)用氧自由基測(cè)試盒檢測(cè)SOD、MDA、NOS，輻照野皮膚整體照相，HE染色觀察炎癥發(fā)展、表皮細(xì)胞、真皮層內(nèi)成纖維母細(xì)胞和毛囊上皮細(xì)胞及膠原纖維的損傷變化。 結(jié)果： ①受照后L929細(xì)胞生長(zhǎng)曲線呈倒“Z

3、”狀，在24h時(shí)輻照組細(xì)胞MTTA570值出現(xiàn)明顯的下降，之后緩慢上升于第3天進(jìn)入指數(shù)增長(zhǎng)期，於第4天達(dá)到最高點(diǎn)，但與正常細(xì)胞生長(zhǎng)曲線有一定差距，之后出現(xiàn)下降趨勢(shì)。受照細(xì)胞在4h和24h發(fā)生了明顯凋亡，凋亡率分別是7.379％和10.287％。在24h、36h和48h，Caspase-3的mRNA表達(dá)量較正常細(xì)胞有明顯增加。受照細(xì)胞發(fā)生G2期阻滯，G2／M期細(xì)胞數(shù)隨時(shí)間逐步增加，在24h達(dá)到最高點(diǎn)，65.965％。 ②受照后SD

4、大鼠皮膚、血漿中丙二醛(MDA)、一氧化氮合酶(NOS)含量有明顯的升高，用藥后有所降低，PQQ噴射治療組低于PQQ口服治療組，但都低于輻照未加藥組(P<0.05)；皮膚、血漿中超氧化物歧化酶(SOD)濃度在受照射明顯下降，應(yīng)用PQQ后SOD量有所升高，PQQ噴射治療組高于PQQ口服治療組，但高于輻照未給藥組(P≤0.05)。整體水平上，輻照未給藥組的大鼠第五周出現(xiàn)了完全脫毛、腫脹、脫皮和潰瘍，兩組PQQ給藥組只有脫毛和輕微脫皮，未見腫

5、脹和潰瘍。HE染色發(fā)現(xiàn)輻照野皮膚的表皮細(xì)胞、真皮層內(nèi)成纖維母細(xì)胞和毛囊上皮細(xì)胞變性壞死，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)明顯，膠原纖維斷裂、極性消失，應(yīng)用PQQ后皮膚組織內(nèi)急性炎癥反應(yīng)輕，膠原纖維斷裂減輕、極性尚好，甚至出現(xiàn)了新生膠原，細(xì)胞出現(xiàn)修復(fù)再生。 結(jié)論：β射線照射后，無論在細(xì)胞還是組織水平上，細(xì)胞增殖受到抑制，并出現(xiàn)明顯的細(xì)胞死亡和凋亡。L929細(xì)胞增殖抑制是通過誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡和G2期阻滯實(shí)現(xiàn)，其細(xì)胞凋亡機(jī)制可能與caspase-3凋亡途徑相