堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子對(duì)中耳放射性損傷防護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：通過(guò)觀察堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)對(duì)豚鼠放射性損傷側(cè)中耳粘膜的病理和超微結(jié)構(gòu)變化的影響，探討bFGF對(duì)中耳放射性損傷有無(wú)保護(hù)作用及其作用機(jī)制。 方法：選用瀘州醫(yī)學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供的標(biāo)準(zhǔn)清潔級(jí)成年白色紅目雄性豚鼠44只，健康，體重300～350g，3月齡；耳廓preyer反射敏感，耳鏡檢查外耳道皮膚無(wú)紅腫，鼓膜完整、無(wú)充血，無(wú)中耳炎及上呼吸道感染跡象。隨

2、機(jī)分為正常對(duì)照組(4只)、模型對(duì)照1天組(10只)、模型對(duì)照30天組(10只)、bFGF1天組(10只)、bFGF30天組(10只)共5組。bFGF組在每次照射前30min按800U/kg的劑量經(jīng)腹腔內(nèi)注射bFGF，模型對(duì)照組在每次照射前30min經(jīng)腹腔內(nèi)注射同等體積生理鹽水，用1％戊巴比妥鈉按40mg/kg的劑量經(jīng)腹腔內(nèi)注射麻醉豚鼠。用產(chǎn)生6MV-X線(時(shí)間劑量率300cGy/min)的醫(yī)用直線加速器制造中耳放射性損傷模型，劑量為30

3、0cGy/次，每周5次，連續(xù)3周，總劑量(total dose，DT)45Gy。分別于照射完后次日處死模型對(duì)照1天組和bFGFl天組及正常對(duì)照組豚鼠，于30天后處死模型對(duì)照30天組和bFGF30天組豚鼠。所有動(dòng)物均經(jīng)腹腔注射戊巴比妥鈉麻醉后，斷頭處死。正常對(duì)照組取雙側(cè)耳，其余組取照射側(cè)耳作標(biāo)本。在解剖顯微鏡下觀察外耳道有無(wú)分泌物、鼓膜有無(wú)穿孔及鼓室有無(wú)積液。并取下鼓室內(nèi)粘膜及咽鼓管(eustachian tube，ET)，作病理切片觀察

4、中耳粘膜的病理改變情況及掃描電鏡觀察中耳粘膜纖毛損傷程度，并用醫(yī)學(xué)圖像分析軟件測(cè)量咽鼓管、鼓室前壁(tympanic cavity nterior wall，TCAW)、鼓岬(promontorium tympani，PT)粘膜的厚度，以及記數(shù)白細(xì)胞浸潤(rùn)數(shù)。計(jì)量資料采用均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，多組間比較用方差分析，用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行分析，規(guī)定P<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果： 1．中耳標(biāo)本大體觀察：①模型對(duì)照

5、1天組：外耳道紅腫，但鼓膜均完整，中耳粘膜充血、水腫明顯，2只出現(xiàn)鼓室積液。模型對(duì)照30天組：鼓膜完整，中耳粘膜充血、水腫，3只出現(xiàn)鼓室積液。②bFGF 1天組及30天組：鼓膜均完整，僅見(jiàn)中耳粘膜稍充血、水腫，未見(jiàn)鼓室積液、積膿 2．病理切片觀察結(jié)果： ①模型對(duì)照1天組：中耳粘膜上皮脫落，纖毛減少，粘膜下充血、水腫及白細(xì)胞浸潤(rùn)明顯，杯狀細(xì)胞明顯增多，伴少量纖維母細(xì)胞增生。模型對(duì)照30天組：粘膜不完整，纖毛減少，充血、水腫

6、及白細(xì)胞浸潤(rùn)減輕，纖維母細(xì)胞明顯增生。 ②bFGF1天組：中耳粘膜上皮完整，纖毛稍有減少，粘膜下輕度充血、水腫，少量白細(xì)胞浸潤(rùn)。bFGF30天組：粘膜較完整，纖毛稍有減少，未見(jiàn)充血、水腫、炎細(xì)胞浸潤(rùn)及纖維母細(xì)胞增生。 3．掃描電鏡觀察結(jié)果： ①模型對(duì)照1天組：粘膜上皮纖毛粘連聚集成團(tuán)、倒伏、方向紊亂，纖毛上有散在的分泌空泡。模型對(duì)照30天組：粘膜纖毛大片脫落，殘留纖毛廣泛粘連、倒伏嚴(yán)重、方向凌亂、結(jié)構(gòu)不清。

7、 ②bFGF1天及30天組：粘膜上皮纖毛方向基本一致，僅尖端有輕微倒伏、粘連。 4．中耳粘膜厚度改變結(jié)果： ①bFGF1天組與模型對(duì)照1天組比較：咽鼓管、鼓室前壁、鼓岬的粘膜厚度明顯較薄，P值均<0.01，差異極顯著。 ②模型對(duì)照30天組與模型對(duì)照1天組比較：咽鼓管、鼓室前壁、鼓岬的中耳粘膜厚度明顯變薄，P值均<0.05，差異有顯著性。 ③bFGF30天組與模型對(duì)照30天組比較：咽鼓管、鼓室前壁、鼓岬的

8、粘膜厚度明顯較薄，P值均<0.01，差異極顯著。 ④bFGF30天組與bFGF1天組比較：咽鼓管、鼓室前壁、鼓岬的中耳粘膜厚度明顯變薄，P值均<0.05，差異有顯著性。 ⑤bFGF 30天組與正常對(duì)照組比較：咽鼓管、鼓室前壁、鼓岬粘膜厚度明顯變厚，P值均<0.01，差異極顯著。 5．中耳粘膜白細(xì)胞浸潤(rùn)情況： ①bFGF1天組與模型對(duì)照1天組比較：咽鼓管、鼓室前壁、鼓岬的白細(xì)胞浸潤(rùn)明顯減少，P值均<0.01

9、，差異極顯著。 ②模型對(duì)照30天組與模型對(duì)照1天組比較：咽鼓管、鼓室前壁、鼓岬的白細(xì)胞浸潤(rùn)明顯減少，P值均<0.05，差異有顯著性。 ③bFGF30天組與模型對(duì)照30天組比較：咽鼓管、鼓室前壁、鼓岬的白細(xì)胞浸潤(rùn)明顯減少，P值均<0.01，差異極顯著。 ④bFGF30天組與bFGF1天組比較：咽鼓管、鼓室前壁、鼓岬的白細(xì)胞浸潤(rùn)明顯減少，P值均<0.05，差異有顯著性。 ⑤bFGF30天組與正常對(duì)照組比較：咽

10、鼓管、鼓室前壁、鼓岬白細(xì)胞浸潤(rùn)明顯增多，P值均<0.01，差異極顯著。 結(jié)論： 1．應(yīng)用醫(yī)用直線加速器總照射劑量達(dá)到45Gy時(shí)即可造成中耳的放射性損傷模型，中耳粘膜的放射性損傷是由電離輻射的原發(fā)作用和繼發(fā)作用及由此所致的咽鼓管功能障礙共同作用所致。 2．bFGF能明顯減輕電離輻射對(duì)中耳粘膜的損傷，減輕炎癥反應(yīng)，抑制纖維化，保護(hù)中耳功能。 3．bFGF對(duì)中耳放射性損傷防護(hù)作用的機(jī)理，可能與其促血管生成、抵抗