人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞與堿性成纖維細(xì)胞因子對(duì)人體創(chuàng)面愈合的促進(jìn)作用.pdf

1、骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)又稱骨髓基質(zhì)細(xì)胞(BMSCs)，存在于骨髓中，來(lái)源廣泛，取材容易，能迅速培養(yǎng)增殖。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞來(lái)源于中胚層，具有很強(qiáng)的自我復(fù)制和多向分化潛能，可產(chǎn)生具有各種表型的子代細(xì)胞，分布在全身各結(jié)締組織中，在體內(nèi)和體外可以分化成為間質(zhì)組織(包括骨、軟骨、脂肪、肌肉)、神經(jīng)組織和肝細(xì)胞等。由于MSCs能分化為各種不同的組織，因此在創(chuàng)傷修復(fù)方面有廣泛的應(yīng)用。在皮膚微環(huán)境下，MSCs可以分化為表皮組織細(xì)胞，已經(jīng)在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

2、中得到了證明。在部分模擬皮膚微環(huán)境的體外實(shí)驗(yàn)中，人MSCs可以出現(xiàn)表皮細(xì)胞角蛋白的表達(dá)，也已經(jīng)有所報(bào)道。 本研究通過(guò)體外分離、培養(yǎng)、誘導(dǎo)人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，利用體外細(xì)胞培養(yǎng)，免疫組織化學(xué)、流式細(xì)胞儀等技術(shù)，從細(xì)胞生物學(xué)、細(xì)胞表型表達(dá)等方面來(lái)觀察人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在體外培養(yǎng)條件下表皮細(xì)胞角蛋白表達(dá)等指標(biāo)，通過(guò)自體對(duì)照實(shí)驗(yàn)研究MSCs與bFGF共同作用于人體創(chuàng)面后對(duì)創(chuàng)面愈合的促進(jìn)作用。 目的: 人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的分

3、離、培養(yǎng)、鑒定及體外培養(yǎng)條件下，人MSCs向表皮細(xì)胞的分化及表皮細(xì)胞角蛋白表達(dá)；MSCs與bFGF共同作用于人體創(chuàng)面后對(duì)創(chuàng)面愈合的促進(jìn)作用。 方法: 1.無(wú)菌條件下取五月齡以上胎兒股骨骨髓腔抽洗液，F(xiàn)icoll-Paque密度梯度離心法提取骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞、無(wú)血清培養(yǎng)法培養(yǎng)并擴(kuò)增。顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)形態(tài)并用免疫細(xì)胞化學(xué)及流式細(xì)胞儀測(cè)定細(xì)胞表面CD34、CD44，進(jìn)行骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的鑒定。 2.用18歲以下新

4、鮮包皮組織培養(yǎng)人成纖維細(xì)胞并收集上清液。 3.MSCs 隨機(jī)分為對(duì)照組和誘導(dǎo)組，用含人成纖維細(xì)胞上清液的培養(yǎng)液(10％FBS/DMEM+30％人成纖維細(xì)胞上清液+10ng/mlEGF)誘導(dǎo)人MSCs向表皮細(xì)胞分化(含血清DMEM培養(yǎng)液作為對(duì)照組)，免疫細(xì)胞化學(xué)染色觀察誘導(dǎo)后CK19含量變化并觀察細(xì)胞形態(tài)變化。 4.選取有兩個(gè)以上創(chuàng)面患者，用自體對(duì)照試驗(yàn)，研究人MSCs與bFGF共同作用于人體創(chuàng)面后對(duì)創(chuàng)面愈合的促進(jìn)作用(

5、單純使用bFGF的創(chuàng)面作為對(duì)照組)。采用SPSS11.0軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。處理組與對(duì)照組的創(chuàng)面閉合指數(shù)的比較在方差齊性檢驗(yàn)的基礎(chǔ)上采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。 結(jié)論: 1.采用密度梯度離心法可以從人骨髓中分離、培養(yǎng)得到細(xì)胞成份均一的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，顯示間質(zhì)干細(xì)胞表面標(biāo)記抗原CD44陽(yáng)性，造血干細(xì)胞表面標(biāo)記抗原CD34陰性，細(xì)胞生長(zhǎng)形態(tài)未發(fā)生明顯變化。 2.骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在體外經(jīng)成纖維細(xì)胞上清液誘導(dǎo)后可出現(xiàn)表