胸導(dǎo)管結(jié)扎對(duì)家兔體重、血糖及胰組織結(jié)構(gòu)影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:免疫組織化學(xué)和免疫細(xì)胞化學(xué)研究表明,胰島主要有四類神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞所組成,即B、A、D和PP細(xì)胞,分別合成并分泌胰島素、胰高血糖素、生長(zhǎng)抑素和胰多肽等多肽類激素和單胺類物質(zhì)。其中,B細(xì)胞數(shù)量最多,它所分泌的胰島素作為體內(nèi)唯一的降糖激素,也是唯一同時(shí)促進(jìn)糖原、脂肪、蛋白質(zhì)合成的激素。對(duì)維持體內(nèi)血糖的相對(duì)穩(wěn)定,起著非常重要的作用。不同種屬的動(dòng)物,胰島素的功能大體相同。胰島素是由胰島B細(xì)胞受內(nèi)源性或外源性物質(zhì)(如葡萄糖、乳糖、核糖、胰高血

2、糖素等)的刺激,而分泌的一種蛋白質(zhì)激素。由A、B兩個(gè)肽鏈組成。胰島素在B細(xì)胞粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的核蛋白體中合成后,以B顆粒的形式儲(chǔ)存于B細(xì)胞中。
　　 傳統(tǒng)知識(shí)認(rèn)為,胰島素等多肽激素通過毛細(xì)血管壁進(jìn)入血液,需經(jīng)肝門靜脈途徑轉(zhuǎn)運(yùn)并發(fā)揮作用,淋巴系統(tǒng)未參與胰島素的吸收和轉(zhuǎn)運(yùn)。然而,有學(xué)者研究認(rèn)為,淋巴管與內(nèi)分泌細(xì)胞關(guān)系密切。根據(jù)毛細(xì)淋巴管的組織結(jié)構(gòu)特點(diǎn),其管徑和通透性遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于毛細(xì)血管,認(rèn)為生物大分子胰島素等多肽激素,更易于進(jìn)入毛細(xì)淋巴管進(jìn)行

3、轉(zhuǎn)運(yùn)。此外,對(duì)于胸導(dǎo)管結(jié)扎后側(cè)支循環(huán)能否很快建立,仍存在不同的結(jié)論。如果胰腺的淋巴回流被阻斷,是否會(huì)對(duì)胰組織結(jié)構(gòu)和糖代謝產(chǎn)生影響呢?基于此觀點(diǎn),本實(shí)驗(yàn)通過手術(shù)結(jié)扎家兔胸導(dǎo)管的方法,制備胰淋巴瘀滯的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型,對(duì)胰組織標(biāo)本經(jīng)常規(guī)HE染色,剛果紅染色,胰淀肽免疫組織化學(xué)染色等,進(jìn)行光鏡和電鏡觀察。
　　 胰淀肽又稱為糖尿病相關(guān)肽,是由37個(gè)氨基酸組成的多肽,與胰島素共同儲(chǔ)存在胰島細(xì)胞的分泌顆粒中;也有研究表明,胰淀肽對(duì)胰島細(xì)胞膜具

4、有毒性作用,還可誘發(fā)胰島素抵抗現(xiàn)象。在2型糖尿病的發(fā)生和發(fā)展過程中,胰島素由正常或超量發(fā)展到分泌減少的變化,也與胰島素淀粉樣蛋白(胰淀肽)的沉積有關(guān)。因此,胰腺內(nèi)出現(xiàn)胰淀肽沉積,是2型糖尿病患者胰腺內(nèi)典型的病理特征。胰島細(xì)胞被胰淀肽沉積取代的多少,決定了2型糖尿病的發(fā)展或嚴(yán)重程度。通過光鏡和電鏡,觀察實(shí)驗(yàn)動(dòng)物胰組織結(jié)構(gòu)的形態(tài)學(xué)變化,并對(duì)正常和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的血糖和體重進(jìn)行比較。為探討胰島素等多肽激素的轉(zhuǎn)運(yùn)途徑,胰淀肽在胰腺的沉積機(jī)制,提供形態(tài)

5、學(xué)方面的依據(jù)。
　　 方法:
　　 1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與取材:選用健康成年家兔20只(由河北醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供),雌雄不拘。隨機(jī)分為兩組。實(shí)驗(yàn)(手術(shù))組和對(duì)照(假手術(shù))組。為了在腹部手術(shù)時(shí)清晰顯示乳糜池和胸導(dǎo)管,借鑒使用植物油灌胃使胸導(dǎo)管增粗呈乳白色的方法,向家兔胃內(nèi)灌入食用油5-10毫升;觀察發(fā)現(xiàn),灌油后約3小時(shí)胸導(dǎo)管和乳糜池充盈最明顯。然后,采用6％水合氯醛(30～35mg/kg)耳緣靜脈麻醉。因?yàn)?胸導(dǎo)管的管壁非常

6、薄,單獨(dú)剝離結(jié)扎容易損傷;故采用臨床食管癌手術(shù)中結(jié)扎胸導(dǎo)管的方法,將胸導(dǎo)管連同周圍的結(jié)締組織一并集束結(jié)扎,避免了單獨(dú)結(jié)扎胸導(dǎo)管而引起的絲線割裂。而且,頸部結(jié)扎由于胸導(dǎo)管注入位置較低,容易造成胸膜項(xiàng)破裂,導(dǎo)致氣胸或由于靜脈大出血致使實(shí)驗(yàn)動(dòng)物死亡,故采用在腹部膈腳下、胸導(dǎo)管起始部進(jìn)行結(jié)扎。假手術(shù)組只是將胸導(dǎo)管充分游離而不做結(jié)扎。術(shù)后實(shí)驗(yàn)動(dòng)物常規(guī)喂養(yǎng),每周采耳尖末梢血測(cè)血糖,測(cè)量前禁食8小時(shí),并測(cè)量體重,觀察兩組家兔體重和血糖的變化,于術(shù)后6

7、個(gè)月,在6％水合氯醛耳緣靜脈深度麻醉下,處死動(dòng)物后快速取家兔胰組織標(biāo)本,用于光鏡和電鏡樣品制備。
　　 2.光鏡樣品制備與觀察:胰腺標(biāo)本石蠟包埋的組織切片,進(jìn)行蘇木精一伊紅染色和光鏡觀察;進(jìn)行剛果紅染色和光鏡觀察;進(jìn)行胰淀肽免疫組織化學(xué)染色和光鏡觀察;顯示兩組動(dòng)物胰組織細(xì)微結(jié)構(gòu)的變化。
　　 3.透射電鏡樣品制備與觀察:行常規(guī)透射電鏡樣品制備,胰腺標(biāo)本超薄組織切片,行透射電鏡觀察;揭示實(shí)驗(yàn)動(dòng)物胰腺(尤其是胰島)的超微結(jié)構(gòu)

8、變化。
　　 結(jié)果:
　　 1.實(shí)驗(yàn)組家兔的血糖與對(duì)照組相比,術(shù)后血糖逐漸升高,差異具有顯著性(P＜0.05);實(shí)驗(yàn)組家兔的平均體重,則低于對(duì)照組,兩組差異具有顯著性(P＜0.05)。其中,實(shí)驗(yàn)組的2例動(dòng)物,于術(shù)后16周出現(xiàn)明顯的血糖升高,血糖高達(dá)7.5-8.2mmol/L;并伴發(fā)體癬,后肢多處潰瘍,體重下降明顯。實(shí)驗(yàn)組家兔與對(duì)照組相比,胰腺外觀顏色蒼白,灰暗,似脂肪組織。
　　 2.光鏡觀察
　　 (1

9、)在HE染色的組織切片上,實(shí)驗(yàn)組的胰腺小葉間隙明顯增寬,結(jié)締組織間隙內(nèi)出現(xiàn)脂肪組織的堆積。大量腺泡細(xì)胞和胰島細(xì)胞的胞漿呈空泡狀。
　　 (2)在剛果紅染色的胰組織切片上,胰腺小葉組織間隙顯著增寬,結(jié)締組織明顯增生,大量脂肪組織堆積,胰島呈現(xiàn)剛果紅染色的朱紅色著色反應(yīng)。
　　 (3)胰淀肽免疫組織化學(xué)染色切片的光鏡觀察顯示,在實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物的胰島及其周圍,呈現(xiàn)胰淀肽免疫反應(yīng)強(qiáng)陽性棕褐色著色反應(yīng)。
　　 3.透射電鏡觀察

10、
　　 胰組織超薄切片透射電鏡觀察顯示,實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物的胰島細(xì)胞間隙增寬,甚至形成細(xì)胞間池樣互相連通的管道結(jié)構(gòu);在細(xì)胞間隙內(nèi),可見大量脂滴樣物質(zhì)、淀粉樣蛋白物質(zhì)甚至形成細(xì)纖維團(tuán)。
　　 結(jié)論:
　　 (1)胸導(dǎo)管結(jié)扎可導(dǎo)致胰淋巴瘀滯,引起實(shí)驗(yàn)家兔的體重,血糖及胰組織結(jié)構(gòu)發(fā)生變化,這些變化可能與脂質(zhì)和胰島素等多肽激素的轉(zhuǎn)運(yùn)障礙有關(guān)。
　　 (2)實(shí)驗(yàn)性胰淋巴瘀滯及其胰組織結(jié)構(gòu)的變化表明,胸導(dǎo)管手術(shù)結(jié)扎后,淋巴側(cè)