腎樂片對家兔Masugi腎炎的實驗研究.pdf

1、目的： 通過注射羊抗兔抗腎血清建立家兔Masugi腎炎(masugi glomemlonephritis MGN)動物模型，并應(yīng)用腎樂片不同劑量對該模型進(jìn)行干預(yù)性治療，觀察對家兔MGN動物模型的24小時尿蛋白、血漿蛋白、血脂、腎功能、血流變、腎臟病理形態(tài)學(xué)的影響，探討腎樂片對家兔MGN的療效及可能的治療機(jī)理，為臨床應(yīng)用提供實驗及理論依據(jù)。 方法： 取家兔腎皮質(zhì)勻漿，與弗氏完全佐劑制成混懸液，每隔2周給綿羊皮下注

2、射，共4次，于末次注射后2周采羊血分離血清，加入等量兔紅細(xì)胞于4℃過夜吸附，離心吸取上清液，于56℃水浴中滅活0.5h，即制得羊抗兔腎血清。選用普通級新西蘭種大耳白兔，雌雄各30只，經(jīng)普通飼料適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，檢測尿蛋白和尿紅細(xì)胞均為陰性，隨機(jī)分為正常組、模型組、雷公藤多甙組、腎樂片低劑量組(低劑組)、腎樂片中劑量組(中劑組)、腎樂片高劑量組(高劑組)，每組10只。除正常組外，其余各組家兔經(jīng)耳緣靜脈注射羊抗兔腎血清，每次2ml,間隔0.5

3、h，連續(xù)6次，測定尿蛋白為陽性表明模型成功。于造模后當(dāng)天各治療組和對照組開始灌胃給藥，正常組和模型組灌服等量蒸餾水。各組動物自由進(jìn)食、飲水。分別于造模后和實驗第28天留取家兔24小時尿液進(jìn)行24小時尿蛋白定量測定，第29天殺檢動物，頸動脈插管取血，用全自動生化分析儀檢測各組家兔血清總蛋白(TP)、白蛋白(Alb)、總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)。全自動血流變儀檢測全血粘度高切變率(ηb200s<'-

4、1>)、全血粘度低切變率(ηb5s<'-1>)、血漿粘度(Tip200s<'-1>)、纖維蛋白原(Fig)、紅細(xì)胞壓積(HCT)。取腎組織在光鏡、電鏡、免疫熒光下觀察其病理變化。 結(jié)果： (1)24小時尿蛋白定量：造模后除正常組外，其余各組均出現(xiàn)大量蛋白尿，與正常組相比均有顯著性差異(P<0.01)；實驗第29天各治療組與模型組相比，中劑組、高劑組和雷公藤多甙組尿蛋白定量均明顯降低，有顯著性差異(P<0.01)；低劑組尿

5、蛋白雖有所下降，但與模型組相比無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。高劑組尿蛋白稍高于雷公藤多甙組，但兩組相比無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。 (2)生化檢測：模型組血清BUN、Scr與正常組相比顯著升高(P<0.01)；各治療組與模型組相比，中劑組、高劑組和雷公藤多甙組血清BUN、Scr明顯降低(P<0.01)；低劑組血清BUN、Scr雖比模型組低，但無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；高劑組血清BUN、Scr稍高于雷公藤多甙組，但無顯著性差

6、異(P>0.05)。模型組血清TP、Alb較正常組明顯降低(P<0.01)；中劑組、高劑組和雷公藤多甙組血清TP、Alb與模型組相比明顯升高(P<0.01)；低劑組TP、Alb雖比模型組高，但無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；高劑組血清TP、Alb稍低于雷公藤多甙組，但無顯著性差異(P>0.05)。模型組與正常組相比，血清TC、TG均明顯增高(P<0.01)；治療組與模型組相比，中劑組、高劑組和雷公藤多甙組血清TC、TG明顯降低(P<0.0

7、5，P<0.01)；低劑組TC、TG雖比模型組低，但無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；高劑組TC、TG與雷公藤多甙組相比，無顯著性差異(P>0.05)。 (3)血液流變學(xué)檢測：模型組ηb200s<'-1>、ηb5s<'-1>、HCT與正常組相比均顯著升高(P<0.01)；各治療組與模型組相比，中劑組、高劑組和雷公藤多甙組ηb200s<'-1>、ηb5s<'-1>、HCT明顯降低(P<0.01)；低劑組雖比模型組低，但無統(tǒng)計學(xué)意義(P

8、>0.05)；高劑組ηb200s<'-1>、ηb5s<'-1>、HCT低于雷公藤多甙組，有顯著性差異(P<0.01.，P<0.05)。模型組ηp200s<'-1>、Fig與正常組相比顯著升高(P<0.01)；各治療組與模型組相比，中劑組、高劑組和雷公藤多甙組ηp200s<'-1>、Fig均顯著降低(P<0.01)；低劑組雖比模型組低，但無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)；高劑組ηp200s<'-1>、Fig低于雷公藤多甙組，有顯著性差異(P<

9、0.01，P<0.05)。 (4)腎組織病理形態(tài)學(xué)觀察：與正常組相比，光鏡下模型組腎小球毛細(xì)血管基底膜增厚，系膜細(xì)胞增生，系膜基質(zhì)增多，部分腎小球局灶節(jié)段性硬化，腎小球囊壁層上皮細(xì)胞增生，可見細(xì)胞性新月體形成。部分腎小管管腔內(nèi)可見蛋白管型，上皮細(xì)胞顆粒變性，間質(zhì)炎癥細(xì)胞浸潤，可見間質(zhì)散在纖維化。電鏡下可見基底膜節(jié)段性不規(guī)則增厚，上皮細(xì)胞足突廣泛融合，內(nèi)皮細(xì)胞腫脹嚴(yán)重。腎樂片治療大、中劑量組光鏡電鏡檢查可見腎小球毛細(xì)血管基底膜輕度

10、增厚及變性，系膜細(xì)胞輕度增生，未見新月體形成，腎小管、間質(zhì)病變明顯減輕，上皮細(xì)胞足突輕微融合，內(nèi)皮細(xì)胞局部腫脹，與模型組相比病變明顯減輕，與雷公藤多甙片治療組相比，差別不明顯。低劑組病變恢復(fù)不好但輕于模型組。免疫熒光所見，模型組腎小球毛細(xì)血管壁IgG呈點線沉積，熒光強(qiáng)度++-+++，而雷公藤多甙組、腎樂片高、中劑量組IgG沉積及熒光強(qiáng)度明顯弱于模型組，熒光強(qiáng)度約為+-++。 結(jié)論： 1 通過給正常家兔注射羊抗兔腎血清建立

11、了家兔MGN模型。 2 腎樂片可降低家兔MGN的尿蛋白、提高血漿蛋白、改善脂代謝、改善血液高凝高粘、降低尿素氮及血肌酐，保護(hù)腎功能。 3 病理形態(tài)學(xué)檢查結(jié)果提示：腎樂片能明顯減輕腎臟組織損害，起到延緩腎臟向間質(zhì)纖維化和腎小球硬化進(jìn)展的作用。 4 腎樂片可能是通過調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能，調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝，改善腎小球腎炎時的血液高粘狀態(tài)，抑制炎癥因子的分泌，抑制系膜細(xì)胞的增殖而發(fā)揮其治療作用的。 5 腎樂片對家