腎舒康對(duì)家兔C-BSA膜性腎病模型干預(yù)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：膜性腎病(MN)是成人腎病綜合征常見(jiàn)的病理類(lèi)型之一，是一種嚴(yán)重危害人類(lèi)健康的腎臟常見(jiàn)病。約25％的病人于發(fā)病數(shù)年后，可逐漸出現(xiàn)腎衰竭。目前治療多采用糖皮質(zhì)激素和細(xì)胞毒藥物治療，但長(zhǎng)期應(yīng)用毒副作用較大，病情緩解率不高且停藥后容易復(fù)發(fā)。因此，尋找療效可靠、毒副作用較小的治療藥物具有重要的臨床意義。中藥復(fù)方腎舒康(SSK)是根據(jù)慢性腎小球腎炎的發(fā)病特點(diǎn)研制的且臨床療效較為肯定的經(jīng)驗(yàn)方。本研究通過(guò)注射陽(yáng)離子化牛血清白蛋白(C-BSA)復(fù)制

2、膜性腎病動(dòng)物模型，應(yīng)用腎舒康不同劑量對(duì)該模型進(jìn)行干預(yù)性治療，通過(guò)觀(guān)察C-BSA膜性腎病家兔模型24小時(shí)尿蛋白、血漿蛋白、血脂、腎功能、腎臟病理形態(tài)學(xué)的改變，研究腎舒康對(duì)膜性腎病的干預(yù)作用及其可能機(jī)制，為其臨床應(yīng)用提供可靠的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。 方法：選用健康新西蘭種大耳白兔48只，普通飼料適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，兩次檢測(cè)尿蛋白和尿紅細(xì)胞均為陰性。參照Border方法進(jìn)行改良，動(dòng)物采用大腸桿菌內(nèi)毒素和C-BSA混合溶液進(jìn)行預(yù)免疫，連續(xù)注射7天后開(kāi)始

3、進(jìn)行正式免疫。6周后取尿蛋白定性為“++”、定量為1g/L及以上者進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，隨機(jī)分為模型組、陽(yáng)性藥物對(duì)照組(雷公藤多苷組)、腎舒康高、中、低劑量組每組8只，并設(shè)正常對(duì)照組每組8只。造模6周后各組均灌胃給藥，雷公藤多苷組給予雷公藤多苷10mg/kg/d灌胃，中劑組按人與家兔動(dòng)物系數(shù)折算的等效劑量3.36g/kg/d灌胃，低劑組和高劑組分別按1.12g/kg/d10.08g/kg/d灌胃給藥，每日1次，連續(xù)1個(gè)月。模型組和正常組給等容量生理

4、鹽水連續(xù)1個(gè)月。各組動(dòng)物自由進(jìn)食、飲水。實(shí)驗(yàn)第6、10周各測(cè)一次24小時(shí)尿蛋白定量。實(shí)驗(yàn)第10周末測(cè)血清總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)。第10周末實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)稱(chēng)家兔體重并全部處死，取雙側(cè)腎臟，稱(chēng)濕重，求腎臟系數(shù)；取新鮮腎組織送免疫熒光檢測(cè)，并取腎組織固定于4％戊二醛和4％的多聚甲醛中分送電鏡、光鏡檢查，每例各選5個(gè)最大切面的腎小球，計(jì)算直徑和細(xì)胞數(shù)，求平均值和標(biāo)準(zhǔn)差。

5、 結(jié)果： 1.24小時(shí)尿蛋白定量：實(shí)驗(yàn)第6周，除正常組外，其余各組均出現(xiàn)大量蛋白尿，與正常組相比均有顯著性差異；實(shí)驗(yàn)第10周，中劑量、高劑量和雷公藤多苷組尿蛋白定量均明顯降低，與模型組相比有顯著性差異，低劑量組尿蛋白雖有所下降，但與模型組相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，腎舒康中、高劑量組與雷公藤多苷組相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 2.實(shí)驗(yàn)第10周各組生化指標(biāo)檢測(cè)：模型組血清TP、ALB較正常組明顯降低；中劑量組、高劑量組和雷公藤多苷組血

6、清TP、ALB與模型組相比明顯升高，低劑量組TP、ALB雖比模型組高，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；高劑量組血清TP、ALB高于雷公藤多苷組，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。模型組與正常組相比，血清TC、TG均明顯增高；治療組與模型組相比，中劑量、高劑量和雷公藤多苷組血清TC、TG明顯降低，低劑量組TC、TG雖比模型組高，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；高劑量組血清TC、TG低于雷公藤多苷組，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。模型組血清BUN、Scr與正常組相比顯著升高；各治療組與模型組相比，中劑量

7、組、高劑量組和雷公藤多苷組血清BUN、Scr明顯降低，低劑量BUN、Scr雖比模型組低，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；高劑量組血清BUN、Scr低于雷公藤多苷組，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 3.腎組織病理形態(tài)學(xué)觀(guān)察：模型組與正常組相比，腎小球腫脹明顯，細(xì)胞增生、細(xì)胞數(shù)增加，光鏡下見(jiàn)腎小球明顯增大，球內(nèi)細(xì)胞數(shù)顯著增多，基底膜增厚和釘突廣泛形成，部分腎小球明顯萎縮，伴新月體形成；免疫熒光下見(jiàn)基底膜IgG沉積明顯增多，熒光強(qiáng)度顯著增強(qiáng)+++～++++；電鏡下

8、基底膜明顯增厚，上皮下大量團(tuán)塊狀電子致密物沉積，足突廣泛融合。治療組與模型組相比，腎小球腫脹及細(xì)胞增生明顯減輕，高、低劑量間差異顯著，且有明顯劑量相關(guān)性；與雷公藤多苷組相比，腎舒康高劑量組作用優(yōu)于雷公藤多苷組，中劑量組作用類(lèi)似雷公藤多苷組二者差異無(wú)顯著性，低劑量組弱于雷公藤多苷組： ①光鏡下雷公藤多苷組病變相對(duì)較輕，球囊內(nèi)有少量纖維蛋白滲出，釘突形成較少且不典型，上皮下免疫沉積物較少，毛細(xì)血管壁增厚程度較輕，毛細(xì)血管內(nèi)未見(jiàn)微血栓

9、形成，部分動(dòng)物少量新月體形成；腎舒康高劑量組較雷公藤多苷組病變程度更輕。腎舒康中、低劑量組的病變程度略輕于雷公藤多苷組。 ②免疫熒光見(jiàn)雷公藤多苷組、腎舒康組IgG沉積及熒光強(qiáng)度明顯弱于模型組，熒光強(qiáng)度約為+～++，尤以腎舒康高劑量組病變減輕明顯。中劑量組及低劑量組的IgG沉積及熒光強(qiáng)度減弱程度均不及高劑量組，但二者均較雷公藤多苷組的病變略輕。 ③電鏡下見(jiàn)雷公藤多苷組與腎舒康組病變相對(duì)較輕，上皮下電子致密物沉積程度較模型組

10、明顯輕微，基底膜厚亦較模型組輕，釘突形成數(shù)量明顯不及模型組多且形成不典型，足突融合多為局灶性。腎舒康高劑量組病變更輕，部分融合足突有恢復(fù)現(xiàn)象。 結(jié)論： 1.腎舒康可以減少C-BSA膜性腎病家兔模型的尿蛋白，提高血漿蛋白，改善脂代謝，降低BUN、Scr，具有保護(hù)腎功能作用。 2.腎舒康可以改善C-BSA膜性腎病家兔模型的腎組織病理形態(tài)學(xué)損傷，延緩其腎小球硬化及腎間質(zhì)纖維化的進(jìn)展。 3.腎舒康對(duì)C-BSA膜性