淋巴淤滯對肥胖大鼠胰組織結(jié)構(gòu)和血糖的影響.pdf

1、目的：糖尿病(diabetes mellitus，DM)是一種因體內(nèi)胰島素分泌相對或絕對不足所導(dǎo)致的一系列代謝紊亂綜合癥，臨床上以血糖升高為主要特點。在國際上，糖尿病可分為1型糖尿病、2型糖尿病、妊娠糖尿病及其他特殊類型的糖尿??；其中，2型糖尿病患者超過95％。胰島素作為機體唯一降血糖激素，目前，對于胰島素在細(xì)胞內(nèi)的合成過程，已經(jīng)有了比較明確的闡述。傳統(tǒng)知識認(rèn)為，機體內(nèi)分泌器官產(chǎn)生的激素，通過血液循環(huán)，轉(zhuǎn)運到全身各靶器官發(fā)揮作用。近年來

2、，有學(xué)者在淋巴系統(tǒng)中檢測到胰島素的存在，這一發(fā)現(xiàn)提示，在生理狀態(tài)下，淋巴系統(tǒng)可能是胰島素的重要轉(zhuǎn)運途徑。胰島素和胰淀素作為大分子多肽物質(zhì)，按一定的比例同步產(chǎn)生、分泌到胰島細(xì)胞外，它們之間存在密切的聯(lián)系。病理解剖學(xué)報道：胰島細(xì)胞及其周圍胰淀素沉積，是早期2型糖尿病患者的典型病理改變。本實驗主要設(shè)計胰腺淋巴回流障礙的實驗動物模型，進一步闡述胰淀素等多肽激素的淋巴轉(zhuǎn)運途徑以及胰腺的組織結(jié)構(gòu)和血糖變化。
　　肥胖(obesity)是指一定

3、程度的明顯超重與脂肪層過厚，是由體內(nèi)脂肪(尤其是甘油三酯)積聚過多而導(dǎo)致的一種病理狀態(tài)?？偹苤?，肥胖尤其是內(nèi)臟肥胖與2型糖尿病發(fā)病率呈正相關(guān)，但是，其具體的發(fā)病機制目前尚不完全明確。脂質(zhì)物質(zhì)，尤其是由腸道吸收攝入的脂肪，約有80％～90％經(jīng)小腸絨毛上的毛細(xì)淋巴管(或稱中央乳糜管)吸收，當(dāng)脂肪攝入過多，勢必會增加淋巴循環(huán)的轉(zhuǎn)運負(fù)荷。本實驗將在脂質(zhì)和胰淀素等多肽類激素的轉(zhuǎn)運途徑上，進一步闡述淋巴循環(huán)對于肥胖大鼠胰腺組織結(jié)構(gòu)和血糖的影響。<

4、br>　　方法：
　　1實驗動物分組與模型制備
　　選用40只健康1月齡SD大鼠，雌雄不拘，體重約100克，身長約12厘米，由河北醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供。隨機分為兩組：A組，正常飲食組(20只)；B組，高脂飲食組(20只)。將實驗動物隨機分組后，A組給予正常飼料，B組給予特殊配制的高脂飼料。10周后A組隨機分為A1假手術(shù)組(10只)；A2手術(shù)組(10只)；B組也隨機分為B1假手術(shù)組(10只)；B2手術(shù)組(10只)。

5、　　每周檢測實驗大鼠的身長、體重和空腹血糖。10周后行胸導(dǎo)管結(jié)扎手術(shù)，術(shù)前半小時用植物油灌胃，在6％水合氯醛腹腔注射全身麻醉下，經(jīng)腹腔在膈腳下結(jié)扎緊貼腹主動脈后壁的乳白色胸導(dǎo)管。假手術(shù)組充分游離胸導(dǎo)管而不結(jié)扎，術(shù)后仍然分組飼養(yǎng)，每周采鼠尾血檢測空腹血糖、測量體重，觀測各項生理變化。結(jié)扎胸導(dǎo)管后分普通飼料和高脂飼料喂養(yǎng)6個月，在水合氯醛腹腔注射全身麻醉下，開腹觀察各腹腔臟器的變化，并快速切取胰腺組織標(biāo)本，置于適當(dāng)保存液中，制備光鏡和電鏡樣

6、品。
　　2普通光鏡樣品制備與觀察
　　胰腺標(biāo)本做適當(dāng)處理后，經(jīng)冰凍、石蠟包埋切片，進行常規(guī)HE染色、胰淀素免疫組織化學(xué)染色，比較各組胰腺組織結(jié)構(gòu)的細(xì)微變化。
　　3透射電鏡樣品制備與觀察
　　胰腺經(jīng)醛類固定后，經(jīng)樹酯包埋做半薄切片定位，用美藍(lán)染色后首先在光鏡下確定胰島的存在，然后選取胰島區(qū)域進行觀察，比較各組胰腺(主要是胰島)組織結(jié)構(gòu)的超微變化。
　　4掃描電鏡樣品制備與觀察
　　部分胰腺標(biāo)本經(jīng)過醛

7、類固定液固定后，經(jīng)過常規(guī)導(dǎo)電、固定、脫水、真空干燥等處理后，固定于電鏡樣品托上，觀察胰腺表面的結(jié)構(gòu)特點。
　　結(jié)果：
　　1胰腺的大體觀察
　　高脂飲食組(B組)與正常飲食組(A組)相比：腹壁、腸系膜等腹膜下，顯示輕微的脂質(zhì)沉積，油膩感，胰腺組織顏色略淡，周圍組織輕微粘連。
　　手術(shù)組(A2組、B2組)與假手術(shù)組(A1組、B1組)相比：各腹腔臟器及腸系膜等處，出現(xiàn)明顯的脂質(zhì)沉積，同時胰腺有明顯脂質(zhì)覆蓋，與肝臟等周

8、圍組織出現(xiàn)粘連。
　　2光鏡觀察
　　(1)HE染色的組織切片，除A1組外，其余三組實驗大鼠的胰組織，均有不同程度的胰島淀粉樣改變，表現(xiàn)為胰島細(xì)胞排列紊亂、腫脹甚至凋亡，細(xì)胞間質(zhì)疏松；胰腺小葉間散在空泡狀改變，結(jié)締組織增生。
　　(2)胰淀素免疫組織化學(xué)染色的胰組織切片，A1組胰島淡染、無明顯的陽性反應(yīng)；其余三組實驗動物在胰腺，尤其是胰島細(xì)胞及其周圍，均出現(xiàn)不同程度的棕褐色陽性反應(yīng)。經(jīng)Imagepro-plus6.0圖

9、像分析后，計算平均光密度值，各組間比較B2＞A2＞Bl＞A1。
　　3超薄組織切片的透射電鏡觀察
　　在高脂飲食假手術(shù)組(B1組)和胸導(dǎo)管結(jié)扎組(A2組、B2組)的大鼠胰腺組織，可見到胰島細(xì)胞間隙增寬、擴大；胰島細(xì)胞分泌顆粒增多，暈環(huán)增大。此外，胰島細(xì)胞周圍常見散在的炎癥細(xì)胞。
　　4胰腺組織表面掃描電鏡觀察
　　大鼠胰腺為腹膜內(nèi)位器官，表面覆蓋由扁平上皮細(xì)胞構(gòu)成的腹膜；與正常假手術(shù)組相比，胸導(dǎo)管結(jié)扎組胰腺腹膜上

10、皮細(xì)胞表面及邊緣部位的微絨毛明顯增多，相鄰幾個上皮細(xì)胞之間的間隙明顯增大。
　　5實驗大鼠各項生理指標(biāo)比較
　　喂養(yǎng)10周時，B組大鼠的體重、Lee's指數(shù)、血糖均明顯升高，經(jīng)SPSS統(tǒng)計軟件分析具有顯著差異性(P＜0.05)，可以認(rèn)為B組成功建立營養(yǎng)性肥胖大鼠動物模型。
　　術(shù)后6個月時，A1組血糖變化不明顯，其余各組血糖出現(xiàn)不同程度升高。各組間比較，血糖升高水平呈現(xiàn)B2＞A2＞B1，經(jīng)SPSS統(tǒng)計軟件分析具有顯著差