RNA干擾GSK-3β基因表達(dá)對(duì)Nogo-A抑制PC12細(xì)胞軸突生長(zhǎng)的影響.pdf

1、目的：研究GSK-3β基因沉默對(duì)Nogo-A抑制PC12細(xì)胞軸突生長(zhǎng)的影響。
　　 方法：構(gòu)建靶向GSK-3β的短發(fā)夾樣RNA（shRNA）真核表達(dá)載體，利用脂質(zhì)體分別轉(zhuǎn)染干擾質(zhì)粒、空白質(zhì)粒和陰性對(duì)照質(zhì)粒到PC12細(xì)胞，轉(zhuǎn)染24h后應(yīng)用熒光倒置顯微鏡觀察轉(zhuǎn)染情況并利用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)GSK-3βRNA的抑制效應(yīng)。加用小鼠神經(jīng)生長(zhǎng)因子誘導(dǎo)PC12分化，促進(jìn)其軸突生長(zhǎng),72h后調(diào)整細(xì)胞密度并加用Nogo-A蛋白,48h后應(yīng)用熒

2、光倒置顯微鏡觀察在Nogo-A蛋白存在的情況下，各組PC12細(xì)胞軸突生長(zhǎng)的不同變化，使用Image-Pro Plus6.0軟件對(duì)各組細(xì)胞的軸突進(jìn)行測(cè)量并利用SPSS軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
　　 結(jié)果：（1）成功構(gòu)建出針對(duì)GSK-3β的shRNA真核表達(dá)載體pGenesil1.1-GSK-3β；（2）在藍(lán)色激發(fā)光下，成功轉(zhuǎn)染的細(xì)胞與未轉(zhuǎn)染的細(xì)胞相比，可發(fā)出綠色熒光。實(shí)驗(yàn)組、空白組和陰性對(duì)照組的轉(zhuǎn)染效率分別為43％、80％、76％（3）