顱內(nèi)動(dòng)脈瘤患者血清差異蛋白質(zhì)譜表達(dá)模型研究.pdf

1、目的：顱內(nèi)動(dòng)脈瘤（intracranial aneurysm IA）是顱內(nèi)動(dòng)脈壁的某一部分因病變而向外突出所形成的永久性擴(kuò)張，主要由于管壁先天性缺陷、動(dòng)脈粥樣硬化、高血壓引起。發(fā)病率居腦血管意外第3位，僅次于腦血栓形成和高血壓腦出血，其致殘率和致死率很高。首次發(fā)生破裂出血后即約有8～32%的患者死亡，1年內(nèi)殘死率在60%以上，2年內(nèi)殘死率在85%以上[2]。由于動(dòng)脈瘤首次出血后繼發(fā)第2、3次出血的風(fēng)險(xiǎn)極高，給患者帶來(lái)極其嚴(yán)重的后果，因此

2、對(duì)顱內(nèi)動(dòng)脈瘤進(jìn)行早期、正確診斷并給予及時(shí)治療對(duì)于降低病死率及改善病人預(yù)后具有重要的臨床意義。其次，現(xiàn)階段對(duì)于顱內(nèi)動(dòng)脈瘤的病因以及病理仍不十分清楚，尋找顱內(nèi)動(dòng)脈瘤患者血清蛋白表達(dá)差異，可以更好的理解其病理改變，為將來(lái)進(jìn)一步研究確定可能的分子標(biāo)記物奠定基礎(chǔ)。我們利用表面增強(qiáng)激光解吸離子化飛行時(shí)間質(zhì)譜（surface-enhanced laser desorption/ion-ization time-of-flight mass spect

3、rometry SELDI-TOF-MS）技術(shù)對(duì)顱內(nèi)動(dòng)脈瘤患者和外傷性蛛網(wǎng)膜下腔出血（tramatic subarachnoid hemorrhage tSAH）患者的血清蛋白質(zhì)進(jìn)行檢測(cè)，通過(guò)Biomarker Wizard3.1系統(tǒng)軟件對(duì)蛋白質(zhì)豐度和質(zhì)荷比（M/S）進(jìn)行分析，期望篩選出可用于臨床顱內(nèi)動(dòng)脈瘤早期診斷的特異性血清生物標(biāo)記，并進(jìn)一步對(duì)顱內(nèi)動(dòng)脈瘤患者和tSAH患者對(duì)照之間有顯著差異的血清蛋白質(zhì)峰進(jìn)行優(yōu)選，建立數(shù)據(jù)庫(kù)，結(jié)合人工神

4、經(jīng)網(wǎng)絡(luò)（artificial neural network ANN）建立診斷模型，從而為臨床早期篩選顱內(nèi)動(dòng)脈瘤提供一種無(wú)創(chuàng)的的輔助手段。 方法：受試標(biāo)本分為2組：顱內(nèi)動(dòng)脈瘤組及tSAH組。收集2007年10月～2009年2月瀘州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院神經(jīng)外科收治的60例發(fā)生SAH的顱內(nèi)動(dòng)脈瘤患者，男35例，女25例，年齡29～61歲，平均年齡45歲，所有患者均采用腦血管造影（DSA）以及CTA證實(shí)存在顱內(nèi)囊性（或梭形）動(dòng)脈瘤并外科手術(shù)治

5、療；tSAH患者55例，男32例，女23例，年齡26～62歲，平均年齡44歲，系腦挫裂傷患者（GCS評(píng)分=9～15分）。測(cè)試組患者均無(wú)其他先天性或嚴(yán)重內(nèi)科疾病，且均為首次發(fā)病入院治療。發(fā)生部位：前交通動(dòng)脈部21例，后交通動(dòng)脈部18例，頸內(nèi)動(dòng)脈分叉處8例，大腦前動(dòng)脈部6例，大腦中動(dòng)脈部3例，基底動(dòng)脈頂端2例，大腦后動(dòng)脈部2例。運(yùn)用SELDI-TOF-MS技術(shù)檢測(cè)40例顱內(nèi)動(dòng)脈瘤患者血清標(biāo)本，40例tSAH（CTA排除顱內(nèi)動(dòng)脈瘤存在）患者血

6、清，（以上病例血清標(biāo)本采集時(shí)間距發(fā)病時(shí)間均不超過(guò)24h），用金芯片（AU芯片）獲取血清蛋白表達(dá)指紋圖譜，并用Biomarker Wizard3.1軟件對(duì)檢測(cè)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，得到的數(shù)據(jù)進(jìn)行初步的統(tǒng)計(jì)學(xué)分析（計(jì)算均值X、P值和標(biāo)準(zhǔn)差S），P<0.05被認(rèn)為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。從顱內(nèi)動(dòng)脈瘤和外傷性蛛網(wǎng)膜下腔出血患者血清蛋白質(zhì)指紋圖譜的具有顯著性差異的質(zhì)荷比中，優(yōu)選出5個(gè)標(biāo)志蛋白（p<0.0001），應(yīng)用人工神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)（Artificial Neu

7、ral Network ANN）建立顱內(nèi)動(dòng)脈瘤的神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)診斷模型，另以其余35例樣本（包括動(dòng)脈瘤20例，tSAH15例）進(jìn)行盲法驗(yàn)證。 結(jié)果： 1.顱內(nèi)動(dòng)脈瘤患者與tSAH患者血清間共檢測(cè)出410個(gè)蛋白質(zhì)峰，其中371個(gè)差異蛋白具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05），利用篩選的5個(gè)顯著性差異蛋白（p<0.0001）建立并訓(xùn)練人工神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)網(wǎng)絡(luò)模型，它們的M/Z分別為2980、3973、5917、6431、9232。 2.利

8、用雙盲方法驗(yàn)證人工神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)模型診斷顱內(nèi)動(dòng)脈瘤的靈敏度為90%，特異度為93.3%，陽(yáng)性預(yù)測(cè)值為94.1%，陰性預(yù)測(cè)值87.5%。 結(jié)論： 1.顱內(nèi)動(dòng)脈瘤和tSAH患者血清蛋白質(zhì)組學(xué)水平有顯著性差異。 2.M/Z為2980、3973、5917、6431、9232的蛋白質(zhì)可能是篩選顱內(nèi)動(dòng)脈瘤患者的差異蛋白，篩選其作為顱內(nèi)動(dòng)脈瘤血清標(biāo)志物建立預(yù)測(cè)模型，為顱內(nèi)動(dòng)脈瘤的早期篩選開(kāi)創(chuàng)了一種新的模式，具有潛在意義。 3