兔VX2肝臟轉(zhuǎn)移瘤DS、MRI、CT與病理對(duì)照研究.pdf

1、目的:建立兔vx2肝臟轉(zhuǎn)移瘤模型,使用DSA及CT、MRI等影像設(shè)備,通過(guò)對(duì)兔vx2肝臟轉(zhuǎn)移瘤模型進(jìn)行DSA及MRI、CT增強(qiáng)掃描,通過(guò)觀察,分析肝臟轉(zhuǎn)移瘤的影像學(xué)表現(xiàn)與病理學(xué)聯(lián)系。
　　 方法:
　　 1.兔vx2肝臟轉(zhuǎn)移瘤模型的建立
　　 1.1 VX2細(xì)胞株制備將瘤細(xì)胞接種于兔后腿上段外側(cè)肌肉內(nèi)成瘤并傳代。2周左右接種處可捫及一2cm×2cm實(shí)質(zhì)性包塊。由耳緣靜脈注入空氣處死兔子。嚴(yán)格無(wú)菌條件下剝離腫瘤,切

2、取包塊邊緣生長(zhǎng)旺盛的魚(yú)肉樣組織置于盛有生理鹽水的平皿中,用眼科剪剔除豆腐渣樣壞死組織和結(jié)締組織。部分制成瘤細(xì)胞懸液待用。部分瘤組織放入凍存管內(nèi)按要求冷凍存放,待日后應(yīng)用。(凍存液的制法:三種試劑由二甲基亞砜、胎牛血清、培養(yǎng)基按照1:4:5比例)
　　 1.2 VX2瘤細(xì)胞懸液的制備在超凈臺(tái)上,我們將魚(yú)肉樣癌組織用眼科剪盡量剪碎,在生理鹽水內(nèi)反復(fù)吹打,經(jīng)200目濾網(wǎng)篩過(guò)濾制成瘤細(xì)胞懸液,離心(1000 r/min)5 min,臺(tái)盼

3、藍(lán)染色計(jì)活細(xì)胞數(shù),配成1×106個(gè)細(xì)胞/ml的VX2細(xì)胞懸液,待種植。
　　 1.3兔肝VX2移植癌模型建立新西蘭大白兔50只,雌雄不限體重為2.5-3.0kg由河北醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。動(dòng)物術(shù)前禁食12 h,用1％戊巴比妥鈉,3ml/kg耳緣靜脈注射全麻,取仰臥位,固定四肢于兔手術(shù)臺(tái)上,上腹部備皮,常規(guī)消毒鋪巾,于劍突下2cm正中開(kāi)腹約2-3cm長(zhǎng),暴露肝左葉下緣,用生理鹽水蘸濕紗布塞到肝左葉下方,依靠紗布與肝的摩擦力拉出

4、肝左葉,在較厚的區(qū)域用1ml注射器針頭向肝門(mén)方向插入肝被摸下約0.5cm-1.0cm處回抽無(wú)回血時(shí),再緩慢注入VX2細(xì)胞懸液0.3ml,注射完畢后快速拔針,在穿刺點(diǎn)處附上一小塊無(wú)菌明膠海綿塊壓迫止血,一方面減少瘤細(xì)胞溢出使腹腔種植；另一方面盡量使腫瘤種植在肝葉深部,可使瘤灶靠近較大血管支易于獲得血供。約半分鐘拿開(kāi)明膠海綿塊看肝臟表面是否出血,確認(rèn)無(wú)出血及瘤細(xì)胞溢出后還納肝臟,逐層縫合。術(shù)后腹腔內(nèi)注入青霉素40萬(wàn)u,分兩層關(guān)腹,即腹膜與腹

5、肌一層,皮膚與皮下組織一層。術(shù)后青霉素40萬(wàn)u靜脈緩慢推注,1次/日,連續(xù)3 d。
　　 2.影像學(xué)及病理學(xué)指標(biāo)檢測(cè)與分析
　　 2.1 CT、MR檢查CT采用美國(guó)GE公司LightSpeed QX/i多層螺旋CT機(jī),行CT平掃和動(dòng)脈期、門(mén)靜脈期及延時(shí)期三期增強(qiáng)掃描。肝臟平掃,掃描參數(shù):80kV,120 FOV14,層厚2.5mm,螺距0.969mm,Pitch1:1；增強(qiáng)掃描采用高壓團(tuán)注方式,延遲5s掃描,掃描24s。

6、造影劑碘海醇1ml/kg,速度為1ml/s。MRI應(yīng)用德國(guó)西門(mén)子1.5T機(jī)掃描,序列采用T1WI,in-phase,SPGR(spoiledgradient-echo sequence),翻轉(zhuǎn)角80度。行MR平掃和動(dòng)脈期、門(mén)靜脈期及延時(shí)期三期增強(qiáng)掃描。
　　 2.2據(jù)CT測(cè)量指標(biāo)進(jìn)行分組在種植后14天對(duì)肝VX2瘤灶行CT/MR平掃加增強(qiáng)掃描,每次掃描前動(dòng)物禁食12 h,不禁水。全麻并固定在自制的檢查板上,共選出30只兔子作為研究

7、對(duì)象,采用數(shù)字表法完全隨機(jī)分為三組:每組10只。分別進(jìn)行CT、MRI、DSA檢查。
　　 2.3 DSA檢查:經(jīng)股動(dòng)脈超選肝總動(dòng)脈插管造影介入治療選用的數(shù)字減影血管造影機(jī)為SIEMENS ANGIOSTARPlus。實(shí)驗(yàn)兔麻醉固定后,腹股溝區(qū)常規(guī)消毒鋪巾。在右側(cè)腹股溝區(qū)域股動(dòng)脈搏動(dòng)最強(qiáng)處沿股骨走形縱行切開(kāi)皮膚,沿股動(dòng)脈分離皮下組織,鈍性分離肌肉組織,暴露股血管鞘,用刀尖劃開(kāi)股動(dòng)脈鞘,分離出股動(dòng)脈長(zhǎng)約2 cm,遠(yuǎn)端用手術(shù)線結(jié)扎,近

8、端穿手術(shù)縫線備用。提緊遠(yuǎn)端縫線,用5F自制血管套針穿刺入股動(dòng)脈,抽出針芯,緩慢送入穿刺針鞘管約4-5cm,在鞘尾端迅速擰上3F動(dòng)脈防漏套鞘,透視下隨后跟入TERUMO PROGREAT微導(dǎo)管及導(dǎo)絲,導(dǎo)絲頭端要長(zhǎng)出導(dǎo)管頭約2.0cm,使管頭至胸12-腰1椎間隙水平,導(dǎo)管頭偏向右前方上下滑動(dòng)尋找腹腔干,若腹腔干不易找出,可行腹主動(dòng)脈造影,腹腔干造影注射劑量為:對(duì)比劑應(yīng)用碘的質(zhì)量濃度為370g/L的優(yōu)維顯,延時(shí)注射1 s,采集速率3幀/秒。注

9、射速率1ml/秒,注射劑量為6ml。1ml/s,總量為5ml,壓力為300kpa。后超選擇至肝固有動(dòng)脈,行肝固有動(dòng)脈造影注射劑量為4ml,注射速率0.8ml/秒,經(jīng)造影證實(shí)腫瘤顯影。術(shù)畢拔除導(dǎo)管及鞘管的同時(shí)結(jié)扎股動(dòng)脈近端及遠(yuǎn)端,逐層縫合并包扎切口,介入術(shù)后預(yù)防感染方法同模型建立部分。
　　 2.4觀察指標(biāo)記錄觀察對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組CT、MRI及DSA造影影像表現(xiàn),統(tǒng)計(jì)歸類。記錄DSA瘤體體積、CT平掃與增強(qiáng)掃描(三期)瘤體大小、MR

10、平掃與增強(qiáng)掃描(三期)瘤體大小,腫瘤的數(shù)目,并觀察腫瘤周?chē)菩袔ё兓?。與病理結(jié)果進(jìn)行對(duì)照,記錄CT、MR及DSA發(fā)現(xiàn)病灶的數(shù)目。
　　 2.5病理檢查動(dòng)物死亡后立刻開(kāi)腹完整切取肝臟標(biāo)本,記錄腫瘤體積大小和病理學(xué)表現(xiàn)。病理標(biāo)本均同時(shí)包含癌組織和癌旁組織,實(shí)驗(yàn)組以病灶邊緣殘存腫瘤部分為中心取材。10％的福爾馬林固定后石蠟包埋切片,切片厚度為4μm。行HE染色,觀察瘤組織大體及鏡下形態(tài)學(xué),并與影像學(xué)表現(xiàn)進(jìn)行對(duì)照。做病理大切片,低倍鏡觀

11、察腫瘤結(jié)構(gòu)。高倍鏡觀察腫瘤各個(gè)層次的結(jié)構(gòu),特別是瘤周強(qiáng)化的血管特征,觀察血管的密度以及觀察瘤周強(qiáng)化的血管特征。
　　 VX2瘤解剖與病理表現(xiàn):肉眼見(jiàn)肝內(nèi)腫塊呈蒼白色,無(wú)包膜,與周?chē)纸绮磺宄?突出肝外部分與腹腔種植腫塊表面凹凸不平,呈菜花樣。
　　 結(jié)果:VX2移植瘤種植成功22只,病理結(jié)果顯示成瘤29處。VX2移植瘤在CT及MRI上表現(xiàn)為占位性病變,呈類圓形或分葉狀低密度或低信號(hào)結(jié)節(jié),增強(qiáng)后發(fā)現(xiàn)富血供VX2移植瘤17處

12、,表現(xiàn)為腫瘤中度強(qiáng)化或明顯強(qiáng)化,腫瘤主體密度或信號(hào)明顯高于肝實(shí)質(zhì)。少血供肝移植瘤12處,腫瘤強(qiáng)化或輕微強(qiáng)化,腫瘤主體保持為低密度或低信號(hào)。富血供腫瘤明顯多于少血供腫瘤(P<0.01)。以病理學(xué)檢查做為金標(biāo)準(zhǔn),CT、MR增強(qiáng)掃描、DSA發(fā)現(xiàn)病灶29處,CT平掃發(fā)現(xiàn)病灶23處,其中2處為假陽(yáng)性,病理未發(fā)現(xiàn)腫瘤組織。MR平掃發(fā)現(xiàn)病灶28處,其中1處為假陽(yáng)性。CT增強(qiáng)掃描、MR增強(qiáng)掃描、DSA的敏感性、特異性、準(zhǔn)確性均為100％。肝VX2瘤影像

13、表現(xiàn):22只種植成功兔中發(fā)現(xiàn)病灶29個(gè),其中16只1個(gè)病灶,5只2個(gè)病灶,1只3個(gè)病灶。病理示8只種植兔肝臟未發(fā)現(xiàn)病灶。種植后14天,CT及MR掃描組瘤體最大直徑(x±s)分別為(2.5±0.7)cm、(2.4±0.5)cm。CT增強(qiáng)掃描顯示腫瘤直徑大于CT平掃(p<0.05),MR增強(qiáng)掃描顯示腫瘤直徑大于MR平掃(p<0.05),CT及MR增強(qiáng)掃描顯示腫瘤直徑與大體病理無(wú)顯著性差異(p>0.05)。
　　 1.CT表現(xiàn):VX2

14、瘤株種植兩周后CT平掃時(shí)腫瘤多呈等或低密度區(qū),增強(qiáng)掃描時(shí)動(dòng)脈期表現(xiàn)為不均勻強(qiáng)化。門(mén)靜脈期表現(xiàn)為瘤灶邊緣環(huán)形強(qiáng)化范圍擴(kuò)大。延時(shí)期腫瘤周?chē)仔袔芏容^門(mén)靜脈期減低。
　　 2.MRI:T1WI呈低信號(hào);T2WI呈不均勻高信號(hào)。病灶邊緣較清楚。有1例顯示右側(cè)及左下腹部多個(gè)大小不等腫塊,最大約4cm×4cm,部分病灶與肝臟有明確分界。T1WI呈低信號(hào),T2WI呈不均勻高信號(hào),其內(nèi)見(jiàn)大小不等片狀相對(duì)低信號(hào)區(qū),病理檢查為鈣化灶。
　　

15、 3.DSA表現(xiàn):腹腔動(dòng)脈造影時(shí)肝固有動(dòng)脈顯示清晰,門(mén)靜脈顯示清晰,腫瘤呈環(huán)形強(qiáng)化或片狀影。腫瘤中心表現(xiàn)為緩慢下降的趨勢(shì),而正常肝實(shí)質(zhì)則呈現(xiàn)持續(xù)緩慢上升的態(tài)勢(shì),在14s以后,腫瘤中心的密度小于正常肝實(shí)質(zhì)的密度。而門(mén)靜脈表現(xiàn)為先是緩慢上升的平臺(tái),然后在10s后表現(xiàn)為快速上升期。此時(shí)門(mén)靜脈密度大于腫瘤中心區(qū)的密度。
　　 4.CT掃描及DSA肝固有動(dòng)脈造影顯示瘤灶直徑小于1.5cm的7處,瘤灶直徑在2-3cm的15處,瘤灶直徑大于