PLA2-LPC途徑在肝細(xì)胞脂性凋亡中的機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　 探討PLA2/LPC途徑在FFAs致肝細(xì)胞脂性凋亡中的作用及分子機(jī)制。
　　 方法：
　　 常規(guī)培養(yǎng)張氏肝細(xì)胞,采用四甲基偶氮唑鹽(MTT)法觀察飽和脂肪酸(棕櫚酸,PA)和PLA2抑制劑作用18小時(shí)后細(xì)胞的增殖情況,用Hoechst33258染色和AnnexinV-PI染色流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡;尼羅紅染色檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)含量;分別運(yùn)用熒光定量PCR及Western-blot方法在mRNA水平及蛋白

2、水平檢測(cè)三種PLA2亞型(sPLA2、cPLA2、iPLA2)的表達(dá),用生化反應(yīng)酶法檢測(cè)細(xì)胞中裂解液中LPC水平。
　　 結(jié)果：
　　 PA干預(yù)后的肝細(xì)胞細(xì)胞增殖抑制率隨PA作用時(shí)間延長(zhǎng)、濃度增加而進(jìn)行性增加,細(xì)胞凋亡明顯增加(P＜0.05);尼羅紅染色顯示PA并未引起細(xì)胞內(nèi)大量脂肪蓄積;PA誘導(dǎo)過(guò)程中,三種PLA2亞型表達(dá)明顯增加;且PA干預(yù)后肝細(xì)胞內(nèi)LPC含量增加。iPLA2特異性抑制劑(BEL),cPLA2特異性抑

3、制劑(AACOCF3)和sPLA2抑制劑(sPLA2-IIAInhibitorⅠ)分別與PA共孵育18小時(shí)后,細(xì)胞活性,細(xì)胞凋亡率較PA單獨(dú)孵育明顯改善。BEL、sPLA2-IIAInhibitorⅠ可使PA誘導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)LPC含量下降,而cPLA2特異性抑制劑AACOCF3對(duì)LPC含量無(wú)明顯影響。
　　 結(jié)論：
　　 PLA2/LPC途徑在游離脂肪酸致肝細(xì)胞脂性凋亡過(guò)程中起重要作用,其中PLA2是這一途徑的關(guān)鍵調(diào)控分子。