蘇云金桿菌晶體蛋白對豬蛔蟲的作用及豬蛔蟲重組As37蛋白的免疫保護(hù)研究.pdf

1、華中農(nóng)業(yè)大學(xué)博士學(xué)位論文蘇云金桿菌晶體蛋白對豬蛔蟲的作用及豬蛔蟲重組As37蛋白的免疫保護(hù)研究姓名：馮漢利申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：預(yù)防獸醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師：姚寶安20060401蘇云臺桿菌晶體蛋白對豬蛔蟲的作用及豬蛔蟲葷組As37蛋白的免疫保護(hù)研究摘要豬蛔蟲病是仔豬常見的多發(fā)性寄生蟲病，可導(dǎo)致仔豬的腹瀉、消瘦、貧血，嚴(yán)重的導(dǎo)致仔豬死亡，嚴(yán)重危害養(yǎng)豬業(yè)。目自口豬蛔蟲病的防治以瞇唑類藥物驅(qū)蟲為主，這些藥物在治療豬蛔蟲的同時(shí)對動物機(jī)體均有不同程度的

2、副作用，且不同程度的殘留，危害人類健康、污染環(huán)境，所以需要尋找防治豬蛔蟲病的一種新藥。自1972年發(fā)現(xiàn)蘇云金芽胞桿菌(Bacillusthuringiensis，Bt)對植物寄生線蟲具有殺蟲活性以來，隨后發(fā)現(xiàn)Bt伴胞晶體毒素對蛇形毛圓線蟲，捻轉(zhuǎn)血矛線蟲，日本血吸蟲等動物寄生蟲的毒性。本研究旨在尋找高毒力的Bt菌株對豬蛔蟲進(jìn)行有效治療。另外，關(guān)于豬蛔蟲的免疫研究近年來取得了一定的進(jìn)展，國外先后報(bào)道了豬蛔蟲重組抗原的免疫活性；國內(nèi)在豬蛔蟲的

3、免疫上還是空白，尚未見到商用豬蛔蟲疫苗。為了更好地防治豬蛔蟲，本研究克隆了豬蛔蟲rAs37基因，構(gòu)建原核表達(dá)載體進(jìn)行高效表達(dá)，并對表達(dá)蛋白的免疫活性進(jìn)行了分析，為開發(fā)豬蛔蟲亞單位疫苗打下基礎(chǔ)。主要研究工作和結(jié)果如下：1Bt伴胞晶體毒素對體外培養(yǎng)的豬蛔蟲幼蟲的毒力將感染性豬蛔蟲卵對小白鼠進(jìn)行人工感染，獲得三期，四期蛔蟲幼蟲，經(jīng)體外培養(yǎng)，用BtYBT1517，YBT1518，YBI“152I，YBT1532，YBl“1537，Rl，R2伴胞

4、晶體毒素分別作用于幼蟲，結(jié)果發(fā)現(xiàn)七種毒素均對豬蛔蟲三期幼蟲有毒殺作用。隨著作用時(shí)間的延長，毒素濃度的增加，蟲體運(yùn)動緩慢，死亡率增加，其在24h、48h時(shí)的半數(shù)致死劑量分別為O875mg／mL，O434mg／mL；O934mg／mL，O452mg／mL#1375mg／mL，O843mg／mL：1023mg／mL，O623mg／mL；1112medmL，O674mg／mL；O951mg／mL，O458mg／mL：O958mg／mL，O460

5、mg／mLYBT1517對豬蛔蟲三期幼蟲殺蟲效果最好，YBI“1518與其毒力相當(dāng)，麗YBT1521的半數(shù)致死量較其他菌株大。毒素含量越高，幼蟲死亡率越高，毒素作用時(shí)間的延長，其半數(shù)致死劑量降低。YBTol517，YBT1518，Rl，R2四種菌株的晶體蛋白對四期幼蟲有毒殺作用。其在24h、48h時(shí)的半數(shù)致死劑量分剔為0935mg／mL，O452mg／mL；O875mg／mL，0415mg／mLO904mg／mL，O453mg／mL；0

6、886mg／mL，O448mg／mLYBT1518、YBT1517、Rl、R2四種晶體蛋白毒力相當(dāng)，其中YBT1518晶體毒素對豬蛔蟲四期幼蟲的殺蟲效果略高于其它三種毒素。2Bt伴胞晶體毒素對小鼠體內(nèi)豬蛔蟲幼蟲不同作用方式的研究及其免疫定位感染豬蛔蟲的小鼠經(jīng)靜脈注射，肌肉注射、灌胃、腹腔注射YBT1517，YBT1518晶體毒素，結(jié)果發(fā)現(xiàn)毒素均對小鼠體內(nèi)蛔蟲幼蟲有顯著驅(qū)殺效果，靜脈注射減蟲率最高，效果極顯著，高于其它三種方式，而肌肉注射