骨骼肌缺血后處理對兔心肌壞死和調(diào)亡的作用.pdf

1、近年來,隨著冠心病發(fā)病率的不斷上升,冠心病已成為危害人類健康的主要疾病之一,其中心肌梗死在許多國家更是成為第一致死原因。冠狀動脈內(nèi)溶栓治療、冠狀動脈介入術(shù)以及冠狀動脈搭橋術(shù)已被廣泛應(yīng)用于臨床,但無論哪種治療措施均可引起心肌再灌注損傷。這些損傷包括心肌收縮功能障礙、再灌注心律失常、心肌細(xì)胞膜通透性改變等等,從而直接影響到治療效果。因此,探求積極、有效的治療措施以減少心肌缺血再灌注損傷有著重要的臨床意義。
　　 1986年,Murr

2、y等人首次提出缺血預(yù)處理的概念,即心肌在一次或多次短暫的缺血再灌注后對隨后出現(xiàn)的較長時間的缺血再灌注有著較強(qiáng)的耐受力。隨后大量的實驗證明了預(yù)處理的保護(hù)作用。但由于臨床中心肌缺血時間的不可預(yù)知性,使預(yù)處理的臨床應(yīng)用受到了很大限制。后來,Zhao等人在對犬心肌缺血再灌注的研究中提出缺血后處理的概念。再灌注早期重復(fù)給予幾次冠脈閉塞與再通,能夠明顯減輕再灌注損傷。缺血后處理在多種動物的心臟模型如犬、豬、兔中均證實對心臟有保護(hù)作用。隨后,不同種屬

3、動物的不同器官如腦、肝、腎、骨骼肌等也被證實有不同程度的保護(hù)作用。2005年,Faraz、Kerendy等人對鼠模型的研究發(fā)現(xiàn)在心肌再灌注前給予腎缺血與再灌注,能夠減少心肌組織肌酸激酶的含量,降低心肌梗死的面積,從而提出遠(yuǎn)端缺血后處理具有心肌保護(hù)作用,并證實這一作用與腺苷等受體的激活有關(guān)。
　　 目前,對心肌遠(yuǎn)端缺血后處理的研究已從肝、腎、腦等重要器官發(fā)展到骨骼肌組織。骨骼肌遠(yuǎn)端缺血后處理具有操作簡單、安全、方便等特點,已有研究

4、證實骨骼肌缺血后處理對再灌注心肌細(xì)胞的壞死具有一定的保護(hù)作用,但骨骼肌的缺血后處理對兔心肌細(xì)胞的凋亡是否具有同樣的保護(hù)作用及其機(jī)制,目前的研究較少,本實驗預(yù)對此問題進(jìn)行研究。
　　 目的:探討在體情況下,骨骼肌缺血后處理對兔缺血再灌注心肌壞死和凋亡的影響。
　　 分組與方法:
　　 36只雄性新西蘭大白兔(購于河北醫(yī)科大學(xué)動物實驗中心),體重2.5-3Kg,隨機(jī)分成3組(每組隨機(jī)選取6只進(jìn)行梗死范圍的測定,另外6

5、只進(jìn)行凋亡測定),如:
　　 1)假手術(shù)組(Sham):僅開胸暴露心臟,冠狀動脈左室支中點處穿線,不結(jié)扎;
　　 2)缺血對照組(UR):冠脈左室支阻斷45min后開放再灌注120min;
　　 3)遠(yuǎn)端后處理組(RPostC):在冠脈缺血39min時采取雙下肢髂外動脈閉塞5min,在心肌再灌注前l(fā)min結(jié)束雙下肢后處理,心肌再灌注120min。
　　 本實驗采用兔在體心臟開胸暴露冠狀動脈的左室支,在左心

6、耳下緣與心尖連線中點穿線結(jié)扎法制作心肌缺血再灌注模型;采用游離雙下肢髂外動脈并用動脈夾定時夾閉、開放固定部位方法制作骨骼肌缺血再灌注模型;采用頸動脈采血、離心,化學(xué)法測定血清CK及LDH。采用依文思藍(lán)(Evans)加TTC雙重染色法,采用面積計算及重量測量的方法確定心肌缺血區(qū)(ischemiczone,IZ)及心肌梗死區(qū)(necroticzone,NZ)范圍;采用Tunel法,即末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶(terminal deoxynucl

7、eotidyltransferase,TdT)介導(dǎo)的生物素(dUTP)切口末端標(biāo)記法進(jìn)行心肌細(xì)胞凋亡的測定;采用免疫組化法測定casepase-3、Bcl-2及Bax蛋白的表達(dá)。
　　 結(jié)果:
　　 1各組動物血流動力學(xué)指標(biāo)及一般情況觀察
　　 1.1血流動力學(xué)指標(biāo)
　　 三組實驗動物在缺血前、缺血后45min及再灌注60min、120min時的心率(HR,bpm)和平均動脈血壓(MAP,mmHg)均未見

8、統(tǒng)計學(xué)差異。
　　 在整個實驗過程中,3組實驗動物在不同時間點的心率(HR,bpm)總體呈下降趨勢,平均動脈血壓(MAP,mmHg)在心肌缺血時總體亦呈下降趨勢,在再灌注后開始有所回升,在再灌注120min末基本恢復(fù)到缺血前水平,但這種變化無統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05)。
　　 1.2三組動物基礎(chǔ)值指標(biāo)
　　 在實驗中,缺血對照(I/R)組與遠(yuǎn)端缺血后處理(RPostC)組動物在體重(G)、左室重量(LV)及左室支

9、結(jié)扎所造成的心肌缺血程度之間無統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05)。
　　 2心肌缺血及梗死范圍:
　　 2.1三組動物之間缺血區(qū)范圍的比較:
　　 缺血區(qū)范圍用缺血區(qū)與左心室的面積比及重量比兩項指標(biāo)來衡量,用IZ/LNg表示缺血區(qū)重量/左室重量;用IZ/LNs表示缺血區(qū)面積/左室面積。缺血對照組(I/R)與骨骼肌后處理組(RPostC)的缺血區(qū)范圍(IZ/LVg、IZ/LVs)均未見統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05)。
　

10、　 2.2三組動物之間梗死區(qū)范圍的比較:
　　 心肌梗死區(qū)范圍用梗死區(qū)與缺血區(qū)的面積比及重量比來表示,分別用NZ/Izs(面積比)和NZ/Izg(重量比)來表示。
　　 與缺血對照組(I/R)相比,骨骼肌后處理組(RPostC)的心肌梗死區(qū)范圍明顯減小(I/R:NZ/Izg35.9±6.3％、NZ/Izs32.7±6.8％vs RPostC:NZ/Izg19.4±5.6％、NZ/Izs17.11±7.74％,P＜0.0

11、5)。
　　 3血清肌酸激酶(CK)及乳酸脫氫酶(LDH)
　　 3.1血清肌酸激酶(CK)的變化:
　　 三組在缺血前CK無統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05)。在心肌再灌注末,RPostC組與I/R組相比,CK釋放明顯減少(3997±865U/L vs6885+1202U/L,P＜0.05)
　　 3.2乳酸脫氫酶(LDH)的變化:
　　 LDH各組基礎(chǔ)值無統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05)。再灌注120min

12、末I/R組及RPostC組LDH值顯著高于Sham組(324+89 vs180±47、294±95 vs180±47,P＜0.05),但RPostC組與I/R組之間無統(tǒng)計學(xué)差異。
　　 4 Tunel檢測的結(jié)果
　　 假手術(shù)組兔心肌組織只有少量凋亡細(xì)胞,缺血再灌注組缺血區(qū)出現(xiàn)大量凋亡細(xì)胞,凋亡指數(shù)為(35.81±1.10)％,遠(yuǎn)端后處理組缺血區(qū)心肌凋亡指數(shù)為(21.79±1.07)％,顯著低于缺血再灌注組(P＜0.05)

13、。
　　 5 Caspase-3蛋白檢測結(jié)果
　　 與假手術(shù)組(4.57±1.72)％比較,缺血再灌注組Caspase-3陽性細(xì)胞指數(shù)明顯增加,(39±2.43)％(P＜0.05);而RPostC組的陽性細(xì)胞指數(shù)(25.03±1.16)％與缺血再灌注組比較顯著減小(P＜0.05)。
　　 6 Bcl-2及Bax的表達(dá)
　　 與假手術(shù)組比較,缺血對照組及遠(yuǎn)端后處理組Bax蛋白表達(dá)指數(shù)、Bcl-2蛋白表達(dá)指數(shù)

14、均升高,遠(yuǎn)端后處理組的Bax/Bcl-2比值降低,而缺血對照組的Bax/Bcl-2比值升高。與缺血對照組相比較,遠(yuǎn)端后處理組Bax蛋白表達(dá)指數(shù)及Bax/Bcl-2比值顯著降低,Bcl-2表達(dá)指數(shù)顯著升高,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1、本研究發(fā)現(xiàn),在再灌注早期給予兔雙下肢髂外動脈短暫缺血再灌注可以減輕兔心肌缺血再灌注損傷。降低血清肌酸激酶的值、減少心肌梗死的范圍。
　　 2、在再灌注