缺血后處理對(duì)兔脊髓缺血-再灌注損傷保護(hù)作用的研究.pdf

1、在臨床中主動(dòng)脈手術(shù)或脊髓手術(shù)等均可能引起不同程度的脊髓缺血，導(dǎo)致神經(jīng)功能障礙，表現(xiàn)為急性或遲發(fā)性截癱，從而影響手術(shù)效果并造成巨大的心理和經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。有資料顯示，胸腹主動(dòng)脈瘤手術(shù)后截癱的發(fā)生率約在6-20％。尋找有效地預(yù)防和治療脊髓損傷的方法是目前研究的熱點(diǎn)之一。眾所周知，缺血預(yù)處理可以減輕腦和脊髓缺血性損傷，但是由于大部分病人缺血發(fā)生的時(shí)間不可預(yù)知，其在臨床應(yīng)用中沒有可操作性。如果短暫缺血處理是在缺血損傷后，其在臨床的可應(yīng)用性就會(huì)大大增加

2、。近年來，高峰等研究發(fā)現(xiàn)對(duì)已經(jīng)缺氧的心肌細(xì)胞進(jìn)行多次短暫復(fù)氧/停氧處理，可以明顯提高心肌細(xì)胞存活率，從而提出了缺氧后處理(hypoxicpostconditioning)的概念。陶凌等在兔和犬心肌缺血/再灌注模型上進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)冠脈阻閉后再灌注前給予反復(fù)多次短暫缺血/再灌注處理，可以減小心肌梗死面積，減輕心肌缺血/再灌注損傷，提出了缺血后處理(ischemiapostconditioning)的概念[陶凌等，2001]。本實(shí)驗(yàn)室在局灶性

3、腦缺血模型上發(fā)現(xiàn)，缺血后處理可以減少腦梗死容積，具有腦保護(hù)作用。但缺血后處理是否能夠減輕脊髓缺血/再灌注損傷尚無定論，而且缺血后處理對(duì)缺血/再灌注損傷的保護(hù)作用機(jī)制很難完全用預(yù)處理作用的機(jī)制來解釋。 本實(shí)驗(yàn)擬應(yīng)用腎下腹主動(dòng)脈(IRA)阻閉致兔脊髓缺血(15min)/再灌注損傷模型，研究缺血后處理是否對(duì)脊髓缺血/再灌注損傷具有保護(hù)作用，測(cè)定缺血后處理對(duì)兔脊髓缺血/再灌注損傷后體內(nèi)丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性的

4、影響，以及缺血后處理對(duì)兔脊髓缺血/再灌注損傷后脊髓熱休克蛋白70(HSP70)表達(dá)的影響，明確缺血后處理部分可能的機(jī)制。 實(shí)驗(yàn)一缺血后處理對(duì)兔脊髓缺血/再灌注損傷的保護(hù)作用及最佳處理時(shí)間的研究目的研究缺血后處理是否可以減輕兔脊髓缺血/再灌注損傷以及最佳處理時(shí)間。方法雄性新西蘭大白兔30只，隨機(jī)分為五組，每組6只。假手術(shù)(Sham)組僅行單純手術(shù)操作但不阻閉腹主動(dòng)脈；對(duì)照(Control)組行單純?nèi)毖?再灌注處理；缺血后處理15s

5、(PA)組：阻閉腹主動(dòng)脈15min后，再灌注15s，缺血15s，反復(fù)3次；缺血后處理30s(PB)組：阻閉腹主動(dòng)脈15min后，再灌注30s，缺血30s，反復(fù)3次；缺血后處理60s(PC)組：阻閉腹主動(dòng)脈15min后，再灌注60s，缺血60s，反復(fù)3次。再灌注48h時(shí)對(duì)所有動(dòng)物的后肢運(yùn)動(dòng)功能進(jìn)行評(píng)分并行脊髓前角正常神經(jīng)元計(jì)數(shù)。結(jié)果PB組再灌注48h后肢運(yùn)動(dòng)功能評(píng)分[3.5(2～4)分]，明顯高于Control組[2(1～3)分](P＜0

6、.05)，其他各組與Control組相比差異無顯著意義。脊髓前角正常神經(jīng)元計(jì)數(shù)PB組為(36.7±7.0)，明顯多于Control組(25.7±4.3)(P＜0.01)，而PA組(18.2±2.2)和PC組(8.0±4.1)則明顯少于Control組(P＜0.05)。結(jié)論缺血后處理對(duì)兔脊髓缺血/再灌注損傷的作用取決于處理時(shí)間，缺血后處理30s/30s對(duì)脊髓缺血/再灌注損傷具有保護(hù)作用，而缺血后處理15s/15s和60s/60s會(huì)加重缺血

7、/再灌注脊髓的損傷。 實(shí)驗(yàn)二缺血后處理對(duì)兔脊髓缺血/再灌注損傷中MDA和SOD的影響目的通過在體兔脊髓缺血/再灌注模型研究缺血后處理對(duì)兔脊髓缺血/再灌注損傷后體內(nèi)MDA含量、SOD活性的影響。方法雄性新西蘭大白兔24只，隨機(jī)分為四組，每組6只。對(duì)照(Control)組僅行單純?nèi)毖?再灌注處理；缺血后處理15s、30s和60s(PA、PB和PC)組分別于阻閉腹主動(dòng)脈15min后，再灌注15s、30s和60s，缺血15s、30s和6

8、0s，反復(fù)3次。各組均在缺血前、缺血10min和再灌注1h時(shí)對(duì)所有動(dòng)物抽取動(dòng)脈血并于再灌注1h時(shí)取脊髓組織勻漿后分別測(cè)定MDA含量和SOD活性。結(jié)果再灌注1h時(shí)血漿和脊髓組織中MDA含量：PA和PB組明顯低于Control組(P＜0.01)，而PC組明顯高于Control組(P＜0.01)；SOD活性：PA和PB組明顯高于Control組(P＜0.01)，PC組明顯低于Control組(P＜0.01)。結(jié)論早期短時(shí)程缺血后處理(15s/

9、15s和30s/30s)具有抗氧化作用，能夠增強(qiáng)內(nèi)源性抗氧化酶活性，抑制再灌注后氧自由基的過量生成，減輕脂質(zhì)過氧化，從而對(duì)兔脊髓缺血/再灌注損傷具有一定保護(hù)作用。 實(shí)驗(yàn)三缺血后處理對(duì)兔脊髓缺血/再灌注損傷后脊髓HSP70表達(dá)的影響目的應(yīng)用免疫組化方法研究缺血后處理對(duì)兔脊髓缺血/再灌注損傷后脊髓HSP70表達(dá)的影響。方法雄性新西蘭大白兔30只，隨機(jī)分為五組，每組6只。假手術(shù)(Sham)組行除缺血/再灌注以外的相同手術(shù)操作；對(duì)照(C

10、ontrol)組僅行單純?nèi)毖?再灌注處理；缺血后處理15s、30s和60s(PA、PB和PC)組分別于阻閉腹主動(dòng)脈15min后，再灌注15s、30s和60s，缺血15s、30s和60s，反復(fù)3次。再灌注48h后對(duì)所有動(dòng)物取脊髓組織石蠟切片后通過免疫組化方法檢測(cè)HSP70表達(dá)水平。結(jié)果再灌注48h時(shí)脊髓組織中HSP70陽性表達(dá)細(xì)胞數(shù)PA、PB和PC組明顯多于Control組(P＜0.01)，PA和PB組明顯多于PC組(P＜0.01)，而P

11、A和PB組之間無顯著差異(P＞0.05)。結(jié)論缺血后處理可以通過增加HSP70的表達(dá)減輕兔脊髓缺血/再灌注損傷，早期后處理比晚期后處理具有更明顯的保護(hù)作用。 由這三個(gè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，我們認(rèn)為缺血后處理對(duì)脊髓缺血/再灌注損傷具有保護(hù)作用，并且早期后處理比晚期后處理具有更明顯的保護(hù)作用。這種保護(hù)作用的部分機(jī)制可能是增強(qiáng)內(nèi)源性抗氧化酶活性，抑制再灌注后氧自由基的過量生成，減輕脂質(zhì)過氧化，增加HSP70的表達(dá)等。 結(jié)論1缺血后處理對(duì)兔