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文檔簡介
1、本實驗將整合有乙肝表面抗原主蛋白基因(HBsAg)的植物表達載體pCAMBIA1301通過根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化番茄,誘導(dǎo)出叢生芽并篩選轉(zhuǎn)基因植株,檢測目的基因的轉(zhuǎn)化情況和表達情況。實驗主要取得了以下進展: 1.將植物表達載體pCAMBIA1301/HB轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌LBA4404,利用利福霉素(Rif)和卡那霉素(Kan)篩選出轉(zhuǎn)化子,經(jīng)PCR和雙酶切鑒定,質(zhì)粒轉(zhuǎn)化成功,攜帶該載體質(zhì)粒的農(nóng)桿菌命名為LBA4404/pCAMBIA/HB
2、。 2.櫻桃番茄幼苗外植體在MS+6-BA2.0+IAA0.2培養(yǎng)基中能很好的誘導(dǎo)分化叢生芽;以25mg/U的潮霉素(Hyg)為選擇壓力能高效篩選出抗Hyg轉(zhuǎn)化植株;轉(zhuǎn)化植株在1/2MS+Hyg25生根培養(yǎng)基中生根正常,植株生長良好;經(jīng)過煉苗后移栽花盆的存活率為100%。 3.用農(nóng)桿菌LBA4404/HB浸染番茄幼苗外植體,以Hyg作為選擇抗生物篩選出抗性轉(zhuǎn)化植株,經(jīng)PCR和Southern-blot檢測證明所得轉(zhuǎn)化植株
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