致瀉大腸埃希菌的分子分型和流行病學研究.pdf

1、目的：
　　 腹瀉是一種世界流行性疾病,是發(fā)展中國家嬰兒和兒童發(fā)病和死亡最常見的原因之一,由各種致瀉大腸埃希菌(DEC)引起的腹瀉是全球許多國家重要的公共衛(wèi)生問題。本研究的目的是通過DEC的分子鑒定與分型從而了解浙江地區(qū)急性腹瀉患者DEC的發(fā)生率、類別、血清型、毒力基因分布特點,及其與年齡、性別、季節(jié)、地區(qū)分布的關系;明確DEC血清型別與毒力基因分布關系;探討主要血清型鑒定DEC的可行性。
　　 方法：
　　 針

2、對六種致瀉大腸埃希菌的12種毒力相關基因(bfpB、escV、stx1、stx2.elt、estla、estlb、invE、pic、aggR、astA、daaD)合成相應的引物,建立同時檢測五種致瀉大腸埃希菌(EPEC、EHEC、ETEC、EIEC、EAEC)的多重PCR(mPCR)方法和測定DAEC的單重PCR方法;將建立的單重和多重PCR方法用于檢測浙江省5個地區(qū)(包括杭州,寧波、紹興、麗水、衢州)2009年6月～2010年8月間1

3、500例急性腹瀉患者糞便標本的DEC,常規(guī)培養(yǎng)法檢測其它致病菌;血清學試驗測定DEC的O、H血清型;比較DEC和其它腸道病原菌的發(fā)生率;比較DEC類別與年齡、性別、季節(jié)、地區(qū)分布差異;分析DEC主要血清型、毒力基因及其兩者的相關性;比較分析100份臨床標本培養(yǎng)菌落和糞便標本直接mPCR法測定DEC的符合率。
　　 結(jié)果：
　　 1.2009年6月～2010年8月浙江省1500例急性腹瀉患者中,共分離病原菌401棟(26.

4、7％),其中DEC191株(12.7％),占所有病原菌的47.6％。同期檢出其它典型致病菌沙門菌12株(0.8％),志賀菌6株(0.4％)。191株DEC中,EAEC分離最多122株(63.8％),其次為ETEC46株(24.1％),EPEC15株(7.9％),EHEC7株(3.7％),EIEC1株(0.5％),未檢到DAEC。
　　 2.成人組DEC和ETEC的檢出率(14.6％、4.3％)高于嬰幼兒組(11.0％、1.3％)

5、和兒童組(4.5％、1.1％),三者有顯著性差異(p=0.009、0.004);而EPEC、EHEC、EIEC,EAEC三組之間無統(tǒng)計學差異。
　　 3.191株DEC在在5個地區(qū)DEC、EAEC、ETEC檢出有地區(qū)差異(P=0.001、0.003、0.010),檢出率紹興最高,杭州次之,其它地區(qū)略低,而EPEC、EHEC、EIEC無地區(qū)差異。
　　 4.789例男性和711例女性急性腹瀉患者中,ETEC的檢出率男性(3

6、.8％)高于女性(2.2％),而EHEC的檢出率女性(0.8％)高于男性(0.1％),但包括其它DEC和總DEC均耒達到統(tǒng)計學差異。
　　 5.1500例急性患者冬春季節(jié)和夏秋季節(jié)DEC的檢出率有一定差異,DEC和ETEC的檢出率夏秋季(13.7％、3.6％)高于冬春季(8.8％、0.7％),兩者有顯著性差異(p=0.036,0.014),而EPEC、EHEC、EIEC和EAEC無顯著性差異。
　　 6.191株DEC中

7、,65株(34.0％)得到分型,分屬21種O血清型,位列前3種(占46.1％)血清型為O6(15,23.1％)、O25(9,13.8％)、O169(6,9.2％)。其中EPEC檢到4種不同血清型;EHEC檢到1種血清型O157:H7;ETEC檢到8種,主要血清型為O6、O25、O159;EAEC分屬17種血清型,主要血清型為O6,O15、O169;EIEC未檢到血清型。
　　 7.191株DEC攜帶10種毒力相關基因共18種模式

8、,主要的基因模式為astA(90株,47.1％)、estla+estlb(31株,16.2％),elt(9株,4.7％);65株已分型菌株中,29株(44.6％)攜帶astA,17株(26.2％)攜帶estla+estlb,6株(9.2％)攜帶elt;前3種血清型O6攜帶的主要基因型為estla+estlb和astA,O25主要的基因型為elt,O169主要的基因型為astA;126株未分型菌株中,61株(48.4％)攜帶astA,14

9、株(11.1％)攜帶estla+estlb。
　　 8.基于菌落法和糞便標本直接基因組DNAmPCR法測定100份臨床標本DEC,兩法測定結(jié)果完全一致89例(陽性12例、陰性77例),不一致11例(僅前者陽性5例,僅后者陽性4例,陽性不同種2例),兩法符合率89％。
　　 結(jié)論：
　　 1.浙江地區(qū)DEC的分離率較高(12.7％),是急性腹瀉的主要病原菌(占比47.6％),至少存在5個群,主要為EAEC,其次是E

10、TEC,EPEC、EHEC,EIEC少見,DAEC罕見。
　　 2.DEC在不同年齡、地區(qū)、季節(jié)有一定的分布特點,但未見統(tǒng)計學上的性別差異。
　　 3.本地DEC的血清分型率較高(34.0％),至少存在21種O血清型,主要血清型為O6、O25、O169,與毒力基因astA、estla+estlb、elt的分布存在一定關系,可用于初步分型。盡管其在鑒定部分血清型方面是有用的,但單用血清分型法鑒定DEC尚顯不足。