釀酒酵母ST-01的發(fā)酵特性與SCAR標(biāo)記研究.pdf

1、本研究以釀酒酵母 (Saccharomyces cerevisiae) 為研究對象，先進(jìn)行常規(guī)啤酒發(fā)酵試驗，通過測定其發(fā)酵過程中的各項指標(biāo)篩選到一株發(fā)酵性能優(yōu)良的菌株ST-01，再通過篩選RAPD標(biāo)記轉(zhuǎn)化為SCAR分子標(biāo)記?？朔薘APD標(biāo)記的不穩(wěn)定缺點，同時保留了RAPD標(biāo)記的隨機擴增多態(tài)性豐富、標(biāo)記快速的優(yōu)點，為探索釀酒酵母快速準(zhǔn)確標(biāo)記提供了方法和數(shù)據(jù)，同時也為生產(chǎn)企業(yè)保護(hù)其專利菌株提供了一個快捷、準(zhǔn)確的方法。 以發(fā)酵性能具

2、有代表性的不同來源的共8株釀酒酵母進(jìn)行啤酒發(fā)酵試驗，比較了不同菌株在發(fā)酵過程中的各項指標(biāo)。試驗結(jié)果顯示：發(fā)酵試驗重復(fù)性較好，各項指標(biāo)一致，其中ST-01菌株在啤酒發(fā)酵中具有凝聚性適中，產(chǎn)氣能力強的感官優(yōu)勢；在發(fā)酵第8天出現(xiàn)雙乙酰的峰值，其峰值為0.55 mg/L，后又以較快的速度發(fā)生雙乙酰的還原，發(fā)酵結(jié)束時雙乙酰的含量下降到0.05 mg/L左右，表明啤酒快速成熟；酒精含量高達(dá)4.536 g/100ml；發(fā)酵結(jié)束后發(fā)酵度達(dá)到了 64.7

3、4％。而其他7株釀酒酵母的降糖能力遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于ST-01菌株。相應(yīng)的雙乙酰和酒精含量的變化也顯示這7株酵母的發(fā)酵性能低于ST-01菌株，預(yù)示ST-01是一株優(yōu)秀的啤酒釀造菌種。 將菌株ST-01和本實驗室保藏的其他22株釀酒酵母菌株分別進(jìn)行分子比較，尋找ST-01基因組特征序列作為分子標(biāo)記。試用50條隨機引物對23株釀酒酵母基因組DNA進(jìn)行RAPD擴增，優(yōu)化后的RAPD擴增體系為：模板DNA為120 ng，2.5mM Mg<'2+>

4、，Taa酶1U，200μM dNTPs，10pmol隨機引物，反應(yīng)總體積為25μL；PCR熱循環(huán)參數(shù)為93℃ 2 min，36℃ 1 min，72℃ 2 min 1次循環(huán)；93℃ 1 min，36℃ 1 min 72℃ 2 min，40次循環(huán)；93℃ 1 min，36℃ 1 min，72℃ 10 min 1次循環(huán)，篩選到P09和P46兩條隨機引物對ST-01菌株具有較好的特異性。P09可以從2.412，ST-01，SK-26，ZD-01

5、四株釀酒酵母基因組DNA中穩(wěn)定擴增出長度為433bp的SCAR-Sc433片斷；P46可以從2.1882，ST-01，NJ-02三株釀酒酵母基因組DNA中穩(wěn)定擴增出長度為665bp的SCAR-Sc665片斷。供試菌株中僅有ST-01能穩(wěn)定的具有這兩個擴增片段。對這兩個片斷進(jìn)行回收后連接到pUCmT質(zhì)粒載體，導(dǎo)入大腸桿菌DH-5α中，篩選陽性克隆，酶切鑒定后的質(zhì)粒經(jīng)過測序根據(jù)序列設(shè)計了2對特異性引物，建立了PCR方法檢測SCAR-Sc43