鴨補體系統(tǒng)的發(fā)育性變化及RA感染的影響.pdf

1、鴨疫里默氏菌(Riemerella anatipestifer，RA)引起的鴨病稱為鴨傳染性漿膜炎，該病呈敗血癥形式，以纖維素性心包炎、肝周炎、腦膜炎、氣囊炎和神經(jīng)癥狀以及部分病例出現(xiàn)干酪樣輸卵管炎、結(jié)膜炎、關節(jié)炎為特征，是養(yǎng)鴨業(yè)最為嚴重的傳染病之一，至今幾乎存在于所有養(yǎng)鴨地區(qū)。該細菌的感染，以發(fā)病率和死亡率高、生長性能下降、肉品質(zhì)量下降、預防和治療費用增加等造成嚴重的經(jīng)濟損失。由于RA耐藥性嚴重，菌株的血清型眾多且缺乏交叉免疫保護，現(xiàn)

2、有免疫接種和抗菌藥物治療措施在生產(chǎn)中的應用受到一定的限制。
　　補體（complement，C）系統(tǒng)是人和動物固有免疫系統(tǒng)重要的組分之一,不但是機體防御病原體的第一道防線,參與清除“危險信號”,而且在調(diào)控炎癥反應和免疫應答的過程中也發(fā)揮極其重要的作用。補體活性的高低，是動物的補體系統(tǒng)抵抗入侵病原微生物能力大小的標志。檢測補體的單個成分及補體的活性測定對于機體免疫系統(tǒng)的功能評價，疾病的診斷與治療，流行病學調(diào)查等均有重要作用。

3、　　本試驗選取四川麻鴨為研究對象，通過建立鴨疫里默氏菌感染模型來研究RA感染前后鴨補體活性的變化、C3d基因和CR2基因的mRNA表達變化及C3d和sCR2蛋白含量的變化，旨在揭示鴨疫里默氏桿菌（RA）感染對鴨補體系統(tǒng)的影響，為進一步研究補體在鴨抗RA感染免疫中的作用奠定基礎。本研究的主要結(jié)果如下：
　　1.麻鴨RA感染模型的建立
　　實驗條件下飼喂的10日齡四川麻鴨腿部皮下注射RA菌液0.2mL/只(1×109cfu/mL

4、)，接種后168h內(nèi)發(fā)病率80％、死亡率70%，其中接種后24h出現(xiàn)明顯的臨床癥狀、死亡高峰期在36h~60h。病死鴨解剖表現(xiàn)出全身漿膜及各組織器官的被膜纖維素滲出附著，呈現(xiàn)典型的纖維素性心包炎、肝周炎；心臟、肝臟、脾臟充血腫大。
　　2.麻鴨血清補體活性的變化
　　利用溶血素致敏雞紅細胞及固定血清稀釋度（1:5）測定麻鴨血清總補體溶血活性。利用1%兔紅細胞及固定血清稀釋度（1:5）測定血清補體旁路途徑溶血活性。麻鴨血清總補

5、體溶血活性1～15d逐漸升高，15～21d趨于穩(wěn)定并接近成年麻鴨；旁路途徑溶血活性1～15d逐漸升高，15～21d趨于穩(wěn)定并接近成年麻鴨。
　　10日齡麻鴨人工感染RA，血清總補體溶血活性在感染后12～24h升高，且高于對照組；36～48h逐漸降低，48～168h逐漸升高，但都低于對照組。血清旁路途徑溶血活性在感染后12～48h逐漸降低，48～168h逐漸升高，但都低于對照組。
　　3.麻鴨C3d、CR2 mRNA表達的變化

6、
　　根據(jù)Genebank上發(fā)表的鴨C3d基因序列（登錄號：EU847624.1）、鴨CR2的EST序列（登錄號：DR765735.1）設計引物，分別以肝臟和脾臟提取總RNA為模板建立RT-PCR，克隆測序得到四川麻鴨C3d和CR2基因片段分別為991bp和347bp。在NCBI上比對發(fā)現(xiàn)四川麻鴨 C3d基因與綠頭鴨 C3d基因相似性達99%，四川麻鴨CR2基因與卷羽鵜鶘CR2基因相似性達90%。
　　依據(jù)已獲得的C3d、C

7、R2基因序列設計熒光定量PCR引物，以鴨β-actin基因作內(nèi)參基因，1日齡作對照，采用2-△△Ct法進行C3d、CR2 mRNA的表達分析。
　　麻鴨C3d mRNA在1～12d表達升高，12～21d表達趨于穩(wěn)定；CR2 mRNA的表達不規(guī)律，在1.00～2.87倍之間，3、6、9、12、15、18和21d的表達分別是1d的1.73倍、1.45倍、2.55倍、1.68倍、1.39倍、1.82倍和2.87倍。
　　10日齡麻

8、鴨人工感染RA后，C3d mRNA的表達12～48h逐漸降低，48～168h逐漸升高，且都低于對照組；CR2 mRNA的表達在感染后12～48h逐漸降低，48～168h逐漸升高，且都低于對照組。
　　4．麻鴨C3d、sCR2蛋白含量的變化
　　根據(jù)鴨C3d ELISA試劑盒和鴨可溶性白細胞分化抗原21（CR2/sCD21）ELISA試劑盒操作說明分別測定麻鴨C3d和sCR2的蛋白含量。
　　麻鴨血清中C3d蛋白含量在1