乳腺導管增生性病變和浸潤性乳腺癌MTDH蛋白表達及SNP篩選的研究.pdf

1、目的：觀察乳腺普通型增生(usual ductal hyperplasia, UDH)、不典型增生(atypicalductal hyperplasia，ADH)、原位癌(ductal carcinoma in situ, DCIS)及浸潤癌(invasivebreast carcinoma，IBC)中MTDH的表達，探討MTDH在乳腺疾病發(fā)生進展過程中的作用。并篩選MTDH基因新的功能性多態(tài)位點，探討其與乳腺癌的關系。方法：本實驗采用

2、免疫組織化學SP三步法檢測80例乳腺導管內(nèi)增生性病變，162例浸潤性乳腺癌和7例正常乳腺組織標本中MTDH的表達。提取65例乳腺癌和60例正常健康人血液基因組DNA，利用PCR擴增和直接測序法，篩選出新的SNP位點。用SPSS13.0軟件對所得數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。
　　 結果：
　　 1.免疫組化染色結果顯示，在增生性病變中，MTDH蛋白高表達率分別為UDH24.14％(7/29)，ADH28.57％(4/14)，DCIS

3、72.97％(27/37)，在正常組織中，MTDH的表達率為0％(0/7)，而在浸潤性乳腺癌中其高表達率為55.56％(90/162)。統(tǒng)計分析，從正常乳腺組織到導管內(nèi)增生性病變再到浸潤性癌的發(fā)展過程中，MTDH蛋白的表達有逐漸升高趨勢，統(tǒng)計學分析有顯著性差異(P＜0.001)。
　　 2.在DCIS中，MTDH的高表達與細胞增殖指標Ki67高表達相關(P=0.008)，在低級別導管內(nèi)癌MTDH的高表達率為59.09％(13/2

4、2)，而在高級別導管內(nèi)癌MTDH的高表達率為93.33％(14/15)，兩者差異有統(tǒng)計學意義(P=0.028)。
　　 3.在浸潤性乳腺癌中，MTDH的高表達分別與患者的年齡(P=0.042)、Ki67增殖指數(shù)(P=0.036)、ER表達狀態(tài)(尸=0.018)和P53表達狀態(tài)(P=0.001)相關，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。結果顯示MDTH高表達的乳腺癌患者較年輕，Ki67增值指數(shù)高，ER陰性表達，P53高表達。

5、　　 4.PCR擴增和直接測序法結果顯示（SNP位點篩選），在MTDH基因5’上游區(qū)和外顯子12的3'UTR區(qū)發(fā)現(xiàn)多處SNP位點，包括-470G＞A、-200G＞A、2928C＞T、3088A＞G、3540T＞C。MTDH外顯子12的3'UTR區(qū)的3個SNP位點(2928C＞T、3088A＞G、3540T＞C)之間均處于完美連鎖不平衡狀態(tài)，D’=1，r2=1。在我們的研究人群中只檢測到2個單倍型，C2928A3088T3540（野生型

6、）和T2928G3088C3540（突變型）。
　　 5.乳腺癌患者組與正常對照組之間，5個SNPs位點的基因型和等位基因頻率分布均無統(tǒng)計學差異（P＞0.05）。
　　 結論：
　　 1.在正常乳腺組織，MTDH蛋白不表達或者低表達，但是從普通型增生、不典型增生到導管原位癌，MTDH的表達強度和水平逐漸增高。研究結果表明MTDH可能在乳腺導管內(nèi)增生性病變的發(fā)生進展中發(fā)揮一定作用。在導管內(nèi)癌中MTDH蛋白表達水平比

7、浸潤性乳腺癌高，表明MTDH可能在乳腺癌發(fā)生的起始階段中起重要作用。
　　 2.MTDH在高增殖活性的浸潤性乳腺癌和DCIS病例中高表達，MTDH過表達與細胞高增殖活性相關。
　　 3.在UDH、ADH和DCIS中，MTDH蛋白的表達強度和陽性率不同。在UDH和ADH，MTDH蛋白表達強度及表達率均低于高級別導管內(nèi)癌，說明MTDH可能在正常細胞到腫瘤細胞的轉(zhuǎn)化過程中起一定作用。
　　 4.在浸潤性乳腺癌中，MTD