Nanog、Dpagt1基因在浸潤性乳腺癌中的表達(dá)及意義.pdf

1、乳腺癌作為女性最常見的腫瘤，其發(fā)病率呈逐年遞增的趨勢，全世界大約有1.15億乳腺癌患者，每年約有41萬女性死于乳腺癌。盡管現(xiàn)在各種抗腫瘤療法使得五年生存率有了很大的改善，但較高的復(fù)發(fā)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移率仍然是乳腺癌患者死亡的主要原因。因此尋找新的治療方法，從而更為有效的遏制腫瘤轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)，一直是惡性腫瘤治療學(xué)研究的重要課題。
　　Nanog是一個參與胚胎干細(xì)胞自我更新的轉(zhuǎn)錄因子。研究表明Nanog基因及其同工型在細(xì)胞惡性表現(xiàn)型形成中起著重

2、要作用。Nanog在多種腫瘤組織中表達(dá)，包括卵巢癌、膀胱癌、胃腺癌、惡性黑色素瘤等。在鼻咽癌的研究中顯示，Nanog表達(dá)與E-鈣黏素的高表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，而與N-鈣黏素的高表達(dá)呈正相關(guān)。Nanog在鼻咽癌的表達(dá)可以促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的生長、抗凋亡和轉(zhuǎn)移。還有研究表明過表達(dá)Nanog的卵巢癌細(xì)胞往往過度增生、遷移和侵襲。敲低Nanog可以使卵巢癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移潛質(zhì)降低、E-鈣黏素mRNA的表達(dá)升高。相反地Nanog過表達(dá)則引起細(xì)胞增生、遷移增強(qiáng)、E-鈣

3、黏素mRNA的表達(dá)下降，說明Nanog特異性的參與了腫瘤的發(fā)生過程，因此Nanog是一種潛在的惡性腫瘤生物學(xué)和預(yù)后的標(biāo)志物，是一種重要的轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子。
　　Dpagt1基因（人多萜-N-乙酰氨基葡萄糖磷酸轉(zhuǎn)移酶1）是一種編碼內(nèi)質(zhì)網(wǎng)低聚糖前體的限速酶的基因，作為限速酶與多種蛋白的糖基化調(diào)節(jié)相關(guān)。Dpagt1高表達(dá)促進(jìn)細(xì)胞增殖并導(dǎo)致細(xì)胞間黏附連接不成熟，研究表明下調(diào)Dpagt1的表達(dá)可導(dǎo)致細(xì)胞間形成成熟的黏附連接進(jìn)而抑制細(xì)胞增殖。而D

4、pagt1基因的突變會導(dǎo)致三磷酸鳥苷酸活性下降，引起先天性的糖基化功能失調(diào)引起早期的胚胎死亡。另一方面，Dpagt1的缺失會導(dǎo)致發(fā)生神經(jīng)發(fā)育遲緩、低血氧及低血糖等疾病，新近的研究表明Dpagt1過表達(dá)與頭頸部鱗狀細(xì)胞癌的發(fā)生密切相關(guān)。
　　但是，在乳腺癌的形成和發(fā)展中，Nanog和Dpagt1的表達(dá)如何及其是否存在相互關(guān)系的研究至今還未見報道。
　　目的：本課題將檢測Nanog、Dpagt1蛋白在100例浸潤性乳腺癌中的表達(dá)

5、情況，探討兩者與乳腺癌各種臨床病理特征間的關(guān)系，并分析兩者間的表達(dá)是否存在相關(guān)性。
　　方法：
　　1研究對象：100例浸潤性乳腺癌組織的石蠟包埋標(biāo)本，病例均來自河北省邢臺市人民醫(yī)院病理科存檔石蠟包埋標(biāo)本。時間從2012年1月至2014年1月，從中隨機(jī)抽取30例對應(yīng)癌旁正常乳腺組織（距離癌組織2cm內(nèi)的正常乳腺組織）石蠟標(biāo)本作為對照組。將所收集的病例按照年齡、絕經(jīng)情況、TNM分期、病理學(xué)分級及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況進(jìn)行分組，并結(jié)合乳

6、腺癌中雌激素受體（ER）、孕激素受體（PR）、C-erbB-2、ki-67的陽性表達(dá)情況，分析兩個指標(biāo)與哪些臨床及病理學(xué)分類有關(guān)，進(jìn)一步探討兩者的相關(guān)性。
　　2研究方法：組織切除后10％中性甲醛固定，石蠟包埋。應(yīng)用免疫組織化學(xué)法檢測100例乳腺癌組織及30例癌旁正常乳腺組織中Nanog和Dpagt1蛋白的表達(dá)情況，探討兩者與乳腺癌各種臨床病理特征間的關(guān)系，并分析兩者間的表達(dá)是否存在相關(guān)性。
　　免疫組織化學(xué)染色判定方法：N

7、anog和Dpagt1的陽性細(xì)胞著色主要定位在細(xì)胞漿與細(xì)胞核，根據(jù)陽性細(xì)胞所占觀察細(xì)胞總數(shù)的百分率以及著色強(qiáng)度的綜合評分進(jìn)行半定量分析。
　　統(tǒng)計學(xué)方法：計數(shù)資料的比較采用χ2檢驗(yàn)(chi-square)，相關(guān)分析采用Spearman相關(guān)分析，以P<0.05為有統(tǒng)計學(xué)差異。
　　結(jié)果：
　　1 Nanog蛋白在浸潤性乳腺癌中的表達(dá)及其臨床意義
　　1.1 Nanog蛋白在正常乳腺組織及乳腺癌中的表達(dá)情況
　

8、　Nanog蛋白表達(dá)主要位于胞核或細(xì)胞質(zhì)中，免疫組化中呈棕黃色顆粒，Nanog蛋白在30例乳腺癌旁組織中，Nanog蛋白陽性表達(dá)率為0%（0/30），在乳腺癌組織標(biāo)本中的陽性表達(dá)率為48%（48/100）,Nanog蛋白在乳腺癌組織中的表達(dá)明顯高于癌旁乳腺組織，有統(tǒng)計學(xué)差異（χ2=22.829，P<0.01）(Fig.1)。
　　1.2 Nanog蛋白表達(dá)對乳腺癌臨床病理特征的影響
　　Nanog蛋白表達(dá)與乳腺癌的臨床病理特

9、征的關(guān)系見Table1。經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析，Nanog蛋白陽性表達(dá)率與乳腺癌患者的年齡、絕經(jīng)情況無相關(guān)關(guān)系（P>0.05）,而與患者的臨床TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、病理組織學(xué)分級具有相關(guān)性（P<0.05）；臨床TNM分期越晚、病理組織學(xué)分級越高，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移越多Nanog的表達(dá)水平越高。
　　Nanog蛋白在乳腺癌的陽性表達(dá)與乳腺癌中雌激素受體（ER）、孕激素受體（PR）、C-erbB-2、ki-67的陽性表達(dá)間的相關(guān)關(guān)系見Table2

10、。統(tǒng)計結(jié)果顯示，乳腺癌組織中Nanog蛋白陽性表達(dá)與ER、PR、C-erbB-2的陽性表達(dá)有明顯的相關(guān)性，呈負(fù)相關(guān)關(guān)系（P<0.05，P<0.05，P<0.05）， ER、PR、C-erbB-2陰性表達(dá)的乳腺癌患者Nanog蛋白陽性表達(dá)率明顯高于ER、PR、C-erbB-2陽性表達(dá)的乳腺癌患者（P<0.05）；而乳腺癌組織中Nanog蛋白陽性表達(dá)與ki-67的陽性表達(dá)呈正相關(guān)關(guān)系（P<0.05）（Table1）。
　　2 Dpag

11、t1蛋白在浸潤性乳腺癌中的表達(dá)及其意義
　　2.1 Dpagt1蛋白在正常乳腺組織及乳腺癌組織的表達(dá)
　　Dpagt1蛋白表達(dá)主要位于細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)中，也有部分表達(dá)表達(dá)于細(xì)胞核，免疫組化中呈棕黃色顆?；蚱瑺钭攸S染色，在30例乳腺癌旁的正常乳腺組織中，Dpagt1陽性表達(dá)率為20%（6/30）；在100例乳腺癌組織標(biāo)本中，Dpagt1陽性表達(dá)率為68%（68/100）。經(jīng)卡方檢驗(yàn)，Dpagt1蛋白在乳腺癌組織中的表達(dá)高于癌旁正常乳

12、腺組織，有統(tǒng)計學(xué)差異（χ2=21.683，P<0.01）(Fig.2)。
　　2.2 Dpagt1蛋白表達(dá)與浸潤性乳腺癌臨床病理特征的關(guān)系
　　Dpagt1蛋白表達(dá)與乳腺癌的臨床病理特征的關(guān)系見Table3。經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析，Dpagt1蛋白陽性表達(dá)率與乳腺癌患者的年齡無相關(guān)關(guān)系（P>0.05）,與絕經(jīng)情況亦無相關(guān)關(guān)系（P>0.05）；而與患者的臨床TNM分期、病理學(xué)分級及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況具有相關(guān)性（P<0.05，P<0.05，P

13、<0.01），尤其是淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況。表現(xiàn)為臨床TNM分期越晚、病理組織學(xué)分級越高，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)目越多，Dpagt1的表達(dá)水平越高。
　　Dpagt1蛋白在乳腺癌的陽性表達(dá)與乳腺癌中雌激素受體（ER）、孕激素受體（PR）、C-erbB-2、ki-67的陽性表達(dá)之間的相關(guān)關(guān)系見Table4。統(tǒng)計結(jié)果顯示，乳腺癌組織中Dpagt1蛋白陽性表達(dá)與ER、PR的陽性表達(dá)沒有明顯的相關(guān)性（P>0.05，P>0.05）；而乳腺癌組織中Dpagt1

14、蛋白陽性表達(dá)與C-erbB-2、ki-67的陽性表達(dá)呈正相關(guān)關(guān)系（P<0.05，P<0.05）， C-erbB-2、ki-67陽性表達(dá)的乳腺癌患者Dpagt1蛋白陽性表達(dá)率明顯高于C-erbB-2、ki-67陰性表達(dá)的乳腺癌患者（P<0.05）。
　　3乳腺癌中Nanog和Dpagt1表達(dá)的相關(guān)性研究
　　Spearman相關(guān)性分析顯示：在乳腺癌中，Nanog蛋白表達(dá)和Dpagt1蛋白表達(dá)呈正相關(guān)（r值=0.316，χ2=9

15、.974，P<0.05）(Table5)。這說明與正常乳腺組織相比，Nanog和Dpagt1的蛋白在乳腺癌中均呈高表達(dá)，二者的高表達(dá)協(xié)同促進(jìn)了乳腺癌的發(fā)生和發(fā)展，并在乳腺癌的浸潤、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中發(fā)揮作用。
　　結(jié)論：
　　1 Nanog蛋白在乳腺正常上皮組織不表達(dá)，在乳腺癌中表達(dá)明顯升高。在乳腺癌中，Nanog蛋白的表達(dá)水平與ER狀態(tài)、PR狀態(tài)、Ki67指數(shù)、組織學(xué)分級、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤分期等已知腫瘤預(yù)后指標(biāo)密切相關(guān)。提示Na

16、nog蛋白參與的信號通路促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)移，抑制細(xì)胞分化，同時與腫瘤的預(yù)后密切相關(guān)。
　　2 Dpagt1在正常乳腺中低表達(dá)，在乳腺癌中高表達(dá)。在乳腺癌中， Dpagt1的表達(dá)水平與Ki67指數(shù)、組織學(xué)分級、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤分期等已知腫瘤預(yù)后指標(biāo)密切相關(guān)。而與ER、PR的陽性表達(dá)沒有明顯的相關(guān)性。提示Dpagt1參與乳腺癌的發(fā)生發(fā)展，并與腫瘤的增殖能力相關(guān)。
　　3 Nanog、Dpagt1在乳腺癌組織中的表達(dá)有正相關(guān)