自體骨髓干細(xì)胞動(dòng)員聯(lián)合辛伐他汀治療腦出血的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、　　目的：研究自體骨髓干細(xì)胞(Bone Mesenchymal Stem Cells,BMSCs)動(dòng)員聯(lián)合辛伐他汀治療腦出血的療效和機(jī)制。
　　方法：選用清潔級(jí)雄性SD大鼠,建模前所有動(dòng)物腹腔注射 5-溴2-脫氧尿嘧啶核苷 (Bromodeoxyuridine, Brdu) 50mg/kg/d33 天。應(yīng)用立體定位向尾狀核注入自體血制備腦出血?jiǎng)游锬Ｐ?腦出血后 24h將大鼠隨機(jī)分為4組：自體BMSCs動(dòng)員聯(lián)合辛伐他汀治療組、自

2、體BMSCs動(dòng)員治療組、辛伐他汀治療組和 PBS對(duì)照組。即 BMSCs 動(dòng)員治療組經(jīng)腹腔注射 rhG-CSF (50ug/kg/d)；辛伐他汀治療組給予口服辛伐他汀2mg/kg/d；自體BMSCs動(dòng)員聯(lián)合辛伐他汀組在BMSCs動(dòng)員治療組基礎(chǔ)上給予口服辛伐他汀 2mg/kg/d；PBS 對(duì)照組給予 PBS,各組動(dòng)物均連續(xù)給藥7d。于術(shù)后24h、7d、14d、21d、28d采用改良神經(jīng)功能缺損程度評(píng)分(modified neurologic

3、al severity score, mNSS )和轉(zhuǎn)角試驗(yàn)( cornering test )檢測大鼠神經(jīng)行為學(xué)變化,HE染色觀察出血周圍組織病理變化,電鏡觀察超微結(jié)構(gòu)改變情況,免疫熒光雙染檢測 BrdU / NSE 雙陽性表達(dá)細(xì)胞數(shù),免疫組織化學(xué)檢測Ⅷ因子表達(dá)情況,TUNEL檢測細(xì)胞凋亡。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差( x±s )表示,采用SPSS 13.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,重復(fù)測量數(shù)據(jù)采用單個(gè)重復(fù)測量因素的方差分析,各組之間比較采用

4、多個(gè)樣本均數(shù)兩兩比較(LSD法),P<0.05為差異有顯著性意義。
　　結(jié)果：1. 神經(jīng)行為學(xué)檢查 腦出血后24小時(shí)各組mNSS評(píng)分、轉(zhuǎn)角測試評(píng)分無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。隨時(shí)間的延長,各組mNSS評(píng)分逐漸下降,治療組1w時(shí)mNSS評(píng)分下降幅度較大,向右轉(zhuǎn)身次數(shù)減少,聯(lián)合組最為顯著。腦出血后 1w、2w、3w、4w各治療組mNSS明顯低于對(duì)照組(P<0.05)。
　　2. 組織病理變化 血腫、組織水腫及缺血面

5、積1w時(shí)開始減少,其消散程度由快到慢順序依次為：聯(lián)合組,動(dòng)員組,辛伐他汀組,對(duì)照組。
　　3. 血腫周圍超微結(jié)構(gòu)變化 出血后 1w,治療組線粒體腫脹程度減輕,破壞的突觸結(jié)構(gòu)逐漸恢復(fù)正常,對(duì)照組仍有嚴(yán)重的超微結(jié)構(gòu)破壞。
　　4. 免疫熒光 BrdU/NSE免疫熒光雙染顯示,腦出血后24小時(shí)血腫周圍可依稀出現(xiàn)BrdU/NSE共表達(dá)(黃色熒光),隨時(shí)間延長,雙標(biāo)陽性細(xì)胞逐漸增多,至2w時(shí)達(dá)高峰,隨后呈遞減趨勢。2w時(shí)聯(lián)合組

6、免疫熒光雙標(biāo)陽性細(xì)胞數(shù)顯著高于辛伐他汀治療組(P<0.05)和自體BMSCs動(dòng)員組P<0.05)。
　　5. 免疫組織化學(xué)檢測 2w時(shí)聯(lián)合組微血管計(jì)數(shù)顯著增多,明顯高于對(duì)照組(P<0.05),自體BMSCs動(dòng)員組、辛伐他汀組均明顯高于對(duì)照組 (P均<0.05)。
　　6. TUNEL 檢測細(xì)胞凋亡 各組血腫周圍細(xì)胞凋亡數(shù)于腦出血后 24h 達(dá)高峰,隨時(shí)間延長呈逐漸下降趨勢。2w時(shí),聯(lián)合組明顯低于其他三組(P均<0.0

7、5),后兩組均明顯低于對(duì)照組 (P均<0.05)。
　　結(jié)論：1. 自體BMSCs動(dòng)員、辛伐他汀單獨(dú)應(yīng)用均具有神經(jīng)保護(hù)作用,促進(jìn)腦出血大鼠神經(jīng)功能恢復(fù),二者聯(lián)合應(yīng)用起協(xié)同相加作用,效果更明顯。
　　2. 自體BMSCs動(dòng)員、辛伐他汀單獨(dú)應(yīng)用均減輕腦出血后病理損害,促進(jìn)超微結(jié)構(gòu)的恢復(fù),二者聯(lián)合應(yīng)用作用更顯著。
　　3. 自體BMSCs動(dòng)員聯(lián)合應(yīng)用辛伐他汀增強(qiáng)協(xié)同促進(jìn)神經(jīng)再生、血管再生。
　　4. 自