PTD-△hNFATminiDBD蛋白在大鼠心臟移植急性排斥模型中的應(yīng)用研究.pdf

1、目的:建立一種簡潔、有效的大鼠異位心臟移植模型,作為器官移植的實驗研究方案。采用大鼠心臟移植急性排斥反應(yīng)模型研究帶蛋白轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域的人NFAT最小DNA結(jié)合域(protein transductiondomain conjiugated human NFAT mini DNA binding domain,PTD-△hNFATminiDBD)體內(nèi)抗移植排斥反應(yīng)的功能。
　　 方法:以O(shè)no法為基礎(chǔ)并在此基礎(chǔ)上進(jìn)行改進(jìn)。受體手術(shù)先進(jìn)

2、行至準(zhǔn)備縫合。供體生理鹽水冰塊腹部降溫至雙腋部低溫后,胸腔打開以冰生理鹽水快速致心跳停止。供心采用直視下縫合。建立Wistar-SD大鼠腹部心臟移植急性排斥模型。增殖含△hNFATminiDBD、PTD-△hNFATminiDBD質(zhì)粒載體的E·Coli M15菌株,誘導(dǎo)△AhNFATminiDBD、PTD-△hNFATminiDBD融合蛋白表達(dá)并提取、純化。Wistar和SD大鼠隨機配對進(jìn)行手術(shù),將手術(shù)成功的36只大鼠隨機分成四組:生理

3、鹽水對照組、△hNFATminiDBD蛋白組、PTD-△hNFATminiDBD蛋白組、環(huán)孢素組。各組術(shù)后第一天分別予以不同劑量的相應(yīng)藥物腹腔注射,每天一次,共一周。觀察移植心臟存活時間并進(jìn)行統(tǒng)計分析,術(shù)后第七天各組中隨機取1例供心切片HE染色。
　　 結(jié)果:成功建立了大鼠心臟移植模型,本項研究采用改良Ono手術(shù)方法,共制作大鼠心臟異位移植模型41例,成功37例,成功率為90.2％。建立的Wistar-SD大鼠腹部心臟異位移植模

4、型隨機分成四組,各組經(jīng)藥物處理后,其供心存活時間分別為:空白對照組:8.63±0.95d、△hNFATminiDBD蛋白組:9.06±1.32d、PTD-△hNFATnubuDBD蛋白組:15.06±0.94d、環(huán)孢素組:22.94±1.15d。PTD-△hNFATminiDBD蛋白組大鼠移植心臟的存活時間較空白對照組顯著延長(P<0.05),但較環(huán)孢素組短(P<0.05)。各組動物心臟組織經(jīng)病理切片后觀察結(jié)果支持統(tǒng)計分析結(jié)果。