蛋白質(zhì)譜技術(shù)預(yù)測大鼠心臟移植后急性排斥反應(yīng)的研究.pdf

1、目的：利用蛋白質(zhì)譜技術(shù)，通過對大鼠心臟移植后發(fā)生急性排斥反應(yīng)的移植物蛋白質(zhì)組學(xué)以及移植前后血清蛋白質(zhì)組學(xué)進(jìn)行對比研究，尋找到差異蛋白。 方法：以套管技術(shù)建立頸部異位異種大鼠心臟移植模型。急性排斥I組，供受體不做預(yù)處理，建立模型術(shù)后5天取血液標(biāo)本及移植物(供心)標(biāo)本；急性排斥II組，供受體不做預(yù)處理，建立模型術(shù)后7天取血液標(biāo)本及移植物(供心)標(biāo)本；治療I組，受體術(shù)前1天腹腔注射環(huán)孢素A(CsA)20mg/kg，術(shù)后每天10mg/k

2、g，術(shù)后5天取血液標(biāo)本及移植物(供心)標(biāo)本；治療II組，受體術(shù)前1天腹腔注射CsA20mg/kg，術(shù)后每天10mg/kg，術(shù)后7天取血液標(biāo)本及移植物(供心)標(biāo)本；空白組，取健康Wistar大鼠移植前血液及心肌組織作標(biāo)本。應(yīng)用表面增強激光解析電離化飛行時間質(zhì)譜(surface enhanced laser desorption ionizationtime of flight mass spectrometry，SELDI-TOF-MS)

3、技術(shù)，以弱陽離子芯片(CM10)結(jié)合血清蛋白質(zhì)及心肌組織蛋白質(zhì)，對各組的血清樣本及心肌組織蛋白質(zhì)樣本進(jìn)行質(zhì)譜測定，應(yīng)用BioMarker Wizard和Biomarker Pattern軟件分析各組之間的差異蛋白質(zhì)并比較分析差異蛋白質(zhì)的峰強度。 結(jié)果：將實驗組與空白對照組血清及心肌組織提取液用PBSII質(zhì)譜儀(CM10芯片)進(jìn)行數(shù)據(jù)采集，應(yīng)用Biomarker Wizard軟件對所有血清及心肌組織蛋白質(zhì)進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化，然后分析空白組

4、與各組血清蛋白質(zhì)峰數(shù)目及相對強度，空白組與急性排斥I組比較中篩選出7個具有統(tǒng)計學(xué)差異的蛋白質(zhì)，質(zhì)荷比分別為2871Da，5613 Da，6973 Da，14893 Da，3438 Da，3965 Da，4312Da。在空白組與急性排斥II組中篩選出11個具有統(tǒng)計學(xué)差異的蛋白質(zhì)峰，質(zhì)荷比分別為2596Da，3438Da，3965Da，4312Da，5495Da，5613Da，6973Da，8283Da，14893Da，15011Da，15

5、887Da。急性排斥I組與治療I組比較，4個蛋白質(zhì)峰具有統(tǒng)計學(xué)意義，質(zhì)荷比分別為3438 Da，4312 Da，5613 Da，6973 Da。急性排斥II組與治療II組比較，6個蛋白質(zhì)峰具有統(tǒng)計學(xué)意義，質(zhì)荷比分別為3438Da，3965Da，4312Da，5613Da，6973Da，14893Da。將各實驗組與空白組移植心臟心肌組織蛋白質(zhì)提取液標(biāo)本進(jìn)行質(zhì)譜測定，在空白組與急性排斥Ⅰ組中篩選出7個具有統(tǒng)計學(xué)差異的蛋白質(zhì)峰，質(zhì)荷比分別為2

6、009Da，4787Da，5176Da，7610Da，8134Da，10821Da，12364Da。在空白組與急性排斥Ⅱ組中篩選出13個具有統(tǒng)計學(xué)差異的蛋白質(zhì)峰，質(zhì)荷比分別為3499Da，4209Da，4787Da，5176Da，7033Da，7610Da，8134Da，8976Da，9652Da，10821 Da，12364 Da，13067Da，15213Da。急性排斥Ⅰ與治療Ⅰ組比較，4個蛋白質(zhì)峰具有統(tǒng)計學(xué)意義，質(zhì)荷比分別為478

7、7Da，5176Da，7610Da，8134Da。急性排斥Ⅱ與治療Ⅱ組比較，7個蛋白質(zhì)峰具有統(tǒng)計學(xué)意義，質(zhì)荷比分別為3499Da，4787Da，5176Da，7610Da，8134Da，8976Da，10821Da。 結(jié)論：通過對血清蛋白質(zhì)差異表達(dá)譜分析得出，質(zhì)荷比為3965Da，3438 Da，14893 Da的蛋白質(zhì)峰可能與急性排斥反應(yīng)的初期相關(guān)，而質(zhì)荷比為8283 Da，15011Da，15887 Da蛋白質(zhì)則可能可以預(yù)測

8、急性排斥反應(yīng)已經(jīng)進(jìn)入高峰期。質(zhì)荷比為4312 Da，5613 Da，6973 Da的蛋白質(zhì)峰值變化可能可以預(yù)測急性排斥反應(yīng)的發(fā)生及發(fā)展。對移植心臟心肌組織蛋白質(zhì)差異表達(dá)譜分析得出，質(zhì)荷比為4787Da，5176Da，7610Da，8134 Da，10821Da的蛋白質(zhì)峰值變化可能可以預(yù)測急性排斥反應(yīng)的發(fā)生及發(fā)展。質(zhì)荷比為12364Da的蛋白質(zhì)峰可能與急性排斥反應(yīng)的初期相關(guān)，而質(zhì)荷比為3499Da，4209Da，7033Da，8976 D