壽胎丸抗大鼠同種異體卵巢移植模型急性排斥反應的機理研究.pdf

1、目的: 本課題通過建立SD 和 Wistar 大鼠間同種異體卵巢移植模型，觀察補腎復方“壽胎丸”對同種異體卵巢移植后急性排斥反應的作用。本實驗旨在通過觀察壽胎丸對大鼠同種異體卵巢移植模型組織形態(tài)學與超微結構的影響、內(nèi)分泌激素的影響、T 淋巴細胞亞群的影響及細胞因子 IL-2、IFN-γ的影響，來探討補腎中藥復方“壽胎丸”抗卵巢移植急性排斥反應的機理。 方法: 238只Wistar 雌性大鼠隨機分為7組，每組大鼠3

2、4只。①壽胎丸低劑量組；②壽胎丸中劑量組；③壽胎丸高劑量組；④CsA組；⑤CsA+壽胎丸中劑量組：⑥正常組；⑦模型組。⑥組為正常組，不予手術處理。移植術前一日以及移植術后第 5—14天，15—28天，29—35 天中雌激素分泌最高峰當日取血檢測血清E<,2>、P、FSH。各組于移植術后 d7、d14、d21、d28、d35 分批處死Wistar大鼠各5、8、8、8、5 只。取血、雙側卵巢及脾臟：檢測與移植排斥密切相關的血清 Th1 細胞

3、因子：IL-2、IFN-γ；用流式細胞儀檢測脾臟 T 淋巴細胞亞群CD3<'+>、CD4<'+>、CD8<'+>的比值；光鏡下計算各個發(fā)育階段卵泡、黃體的數(shù)量，觀察間質(zhì)的變化，以及組織壞死或纖維化程度；電鏡下觀察移植卵巢超微結構變化。觀察記錄各組動物的體重、活動、皮毛、進食及糞便情況，比較分析藥物的副反應。 結果: 1．移植卵巢組織形態(tài)學及超微結構 移植術后，各卵巢移植組大鼠動情周期恢復率由高到低依次是：CsA＋

4、壽胎丸中劑量組、CsA組、壽胎丸高劑量組、壽胎丸中劑量組、壽胎丸低劑量組、模型組。壽胎丸低、中、高劑量組、CsA 組、CsA＋壽胎丸中劑量組移植卵巢體積和重量均較正常組卵巢有增加；且均高于模型組，差異有顯著性(P<0.01)。壽胎丸低、中劑量組移植卵巢重量低于壽胎丸高劑量組，差異有顯著性 (P<0.05)。CsA＋壽胎丸中劑量組大鼠移植卵巢的間質(zhì)損害程度最輕。壽胎丸低、中、高劑量組、CsA組、CsA＋壽胎丸中劑量組的卵巢黃體、原始卵泡、

5、初級生長卵泡、成熟卵泡數(shù)目均高于模型組，差異有顯著性(P<0.01)。壽胎丸中、高劑量組、CsA組、CsA＋壽胎丸中劑量組的次級生長卵泡數(shù)目均高于模型組，差異有顯著性(P<0.01)。壽胎丸低、中劑量組初級生長卵泡數(shù)目均低于壽胎丸高劑量組，差異有顯著性(P<0.01)。壽胎丸低、中、高劑量組次級生長卵泡數(shù)目相比較，均有顯著性差異，(P<0.01)。CsA＋壽胎丸中劑量組的原始卵泡和初級生長卵泡數(shù)目顯著高于CsA組 (P<0.01)。

6、 移植術后21天，模型組卵巢超微結構呈現(xiàn)急性排斥反應的表現(xiàn)。壽胎丸低、中、高劑量組、CsA 組、CsA＋壽胎丸中劑量組移植卵巢超微結構基本正常，新生毛細血管結構正常。移植術后35天，各組移植卵巢超微結構均呈現(xiàn)褪化現(xiàn)象，但CsA＋壽胎丸中劑量組褪化程度較輕。 2．血清內(nèi)分泌激素E<,2>、P、FSH 移植術前，各卵巢移植組血清E<,2>、P水平均低于正常組，差異有顯著性(P<0.01)。在移植術后5—14 天血清 E<

7、,2>、P水平有大幅度升高，與移植前水平相比較，有顯著性差異(P<0.01)。 移植術后15—28天，壽胎丸低、中、高劑量組、CsA組、CsA＋壽胎丸中劑量組血清 E<,2>、P水平繼續(xù)升高，均高于模型組，差異有顯著性 (P<0.01)。CsA＋壽胎丸中劑量組血清E<,2>、P水平最高，與正常組相比，無顯著性差異。壽胎丸低劑量組血清E<,2>、P水平低于壽胎丸高劑量組，差異有顯著性 (P<0.01)。 移植術后29—35

8、天，壽胎丸低、中、高劑量組、CsA組、CsA＋壽胎丸中劑量組血清E<,2>、P水平均高于模型組，差異有顯著性 (P<0.01)。CsA＋壽胎丸中劑量組血清E<,2>、P水平高于模型組、壽胎丸低、中、高劑量組及CsA組。壽胎丸低劑量組與壽胎丸高劑量組血清P水平相比，有顯著性差異(P<0.05)。 移植術前各卵巢移植組血清FSH水平均高于正常組，差異有顯著性(P<0.01)。壽胎丸低、中、高劑量組、CsA．組、CsA＋壽胎丸中劑量組

9、移植術后FSH水平開始逐漸下降，移植術后5—14天、術后15—28天及術后29—35天血清FSH水平均低于移植前水平，差異有顯著性。模型組大鼠移植術后各時間段的血清FSH水平比較，無顯著性差異。 3．脾臟T淋巴細胞亞群CD3<'+>、CD4<'+>、CD8<'+>含量 移植術后7天，各卵巢移植組大鼠脾臟CD3<'+>、CD4<'+>、CD8<'+>含量比正常組明顯升高，差異有顯著性。移植術后14天，CsA＋壽胎丸中劑量組

10、CD3<'+>含量較術后7天降低明顯，差異有顯著性(P<0.05)。組間比較，壽胎丸中、高劑量組、CsA組、CsA＋壽胎丸中劑量組CD3<'+>含量均低于模型組，差異有顯著性。壽胎丸高劑量組、CsA組、CsA＋壽胎丸中劑量組CD4<'+>含量較術后7天降低明顯，差異有顯著性。組間比較，壽胎丸低、中、高劑量組、CsA組、CsA＋壽胎丸中劑量組CD4<'+>含量均低于模型組，差異有顯著性。壽胎丸低、中、高劑量組大鼠脾臟CD8<'+>水平高于

11、正常組，差異有顯著性(P<0.05)。 移植術后21天，壽胎丸低、中、高劑量組、CsA組、CsA＋壽胎丸中劑量組大鼠脾臟CD3<'+>、CD4<'+>含量繼續(xù)下降，均低于模型組(P<0.01)。壽胎丸低、中劑量組大鼠脾臟CD3<'+>含量高于正常組，差異有顯著性(P<0.01)。壽胎丸低、中劑量組CD4<'+>含量高于正常組、壽胎丸高劑量組、CsA組、CsA＋壽胎丸中劑組，差異有顯著性。 移植術后28天，壽胎丸低、中、高

12、劑量組、CsA組、CsA＋壽胎丸中劑量組大鼠脾臟CD3<'+>、CD4<'+>含量繼續(xù)降低，均低于模型組(P<0.01)。壽胎丸低劑量組CD3<'+>、CD4<'+>含量高于壽胎丸高劑量組、CsA組、CsA＋壽胎丸中劑量組及正常組，差異有顯著性。CsA組、CsA＋壽胎丸中劑量組CD8<'+>含量低于模型組，差異有顯著性(P<0.05)。 移植術后35天，壽胎丸低、中、高劑量組、CsA組、CsA＋壽胎丸中劑量組大鼠脾臟CD3<'+

13、>含量、CD4<'+>含量仍較低，均低于模型組，差異有顯著性(P<0.01)。壽胎丸低劑量組的大鼠脾臟CD3<'+>、CD4<'+>含量高于正常組，差異有顯著性。各組CD8<'+>水平相比，無顯著性差異。 4．血清細胞因子IL-2、IFN-γ 各卵巢移植組大鼠移植術后7天的血清IL-2水平較高，均高于正常組水平，差異有顯著性。移植術后14天時各卵巢移植組血清IL-2水平有所下降，壽胎丸中、高劑量組、CsA＋壽胎丸中劑量、

14、CsA組血清IL-2水平均低于模型組，差異有顯著性。移植術后21天，壽胎丸低、中、高劑量組、CsA組、CsA＋壽胎丸中劑量組血清IL-2水平繼續(xù)下降，均低于模型組水平，差異有顯著性。移植術后28天，CsA＋壽胎丸中劑量組大鼠血清IL-2 水平低于模型組，差異有顯著性 (P<0.05)。移植術后35天，各組大鼠血清 IL-2 水平組間比較，無顯著性差異。 移植術后7天，各卵巢移植組大鼠血清IFN-γ水平均較正常組升高，差異有顯著性

15、。移植術后14天，模型組血清IFN-γ水平較正常組升高，差異有顯著性(P<0.01)。移植術后21天，CsA組、CsA＋壽胎丸中劑量血清IFN-γ水平低于術后7天水平，差異有顯著性(P<0.05)。組間比較，模型組血清IFN-γ水平較正常組升高，差異有顯著性(P<0.05)。移植術后28天，壽胎丸低、中、高劑量組、CsA組、CsA＋壽胎丸中劑量組血清IFN-γ水平低于術后7天水平，差異有顯著性。組間比較，壽胎丸中、高劑量組、CsA＋壽胎

16、丸中劑量組、CsA組血清IFN-γ水平低于模型組，差異有顯著性。移植術后35天，CsA＋壽胎丸中劑量組血清 IFN-γ水平低于模型組，差異有顯著性(P<0.05)。 結論: 1．壽胎丸有助于移植術后大鼠動情周期的恢復，與CsA聯(lián)合應用，協(xié)同作用明顯。壽胎丸促進移植卵巢的成活，使其重量和體積增加，壽胎丸高劑量組在促進移植卵巢重量增加方面優(yōu)于壽胎丸低、中劑量組。壽胎丸可以減輕移植卵巢急性排斥反應引起的間質(zhì)損害程度，與CsA聯(lián)

17、合應用，有協(xié)同作用。壽胎丸有促進移植卵巢黃體及各階段卵泡發(fā)育的作用，尤其是對原始卵泡及初級生長卵泡的發(fā)育有更明顯的作用，并且存在一定的量效關系。壽胎丸與CsA聯(lián)合應用，可以減輕移植卵巢超微結構的異常改變。 2．壽胎丸可促使移植卵巢恢復內(nèi)分泌功能，減緩其內(nèi)分泌功能的丟失，與CsA聯(lián)合應用，有協(xié)同作用；壽胎丸低、中、高劑量間有一定的量效關系。壽胎丸可促使移植卵巢與垂體建立負反饋調(diào)節(jié)反應。 3．壽胎丸抑制了大鼠同種異體卵巢移植