不同HBV感染者外周血中Th17細(xì)胞、IL-21及其它細(xì)胞因子的分析.pdf

1、乙型肝炎病毒（HBV）慢性感染嚴(yán)重威脅著人類的健康，HBV慢性感染的發(fā)病機(jī)理仍未闡明，嚴(yán)重阻礙了有效治療措施的研發(fā)。一般認(rèn)為HBV對肝細(xì)胞無直接致病性，導(dǎo)致肝臟損傷的機(jī)制主要是由機(jī)體的免疫系統(tǒng)介導(dǎo)的，并依賴于病毒的不斷復(fù)制。近年研究表明,T細(xì)胞亞群介導(dǎo)的細(xì)胞免疫以及細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)的調(diào)控在乙型病毒性肝炎肝細(xì)胞免疫病理損害中起著重要的作用。目前，CD4+T細(xì)胞可以分為Th1、Th2、Treg、Th17、Tfh、Th9、Th22等細(xì)胞亞群，可以

2、分泌IFN-γ、IL-2、TNF-α、IL-4、IL-10、IL-17、IL-21、IL-22等眾多的重要的細(xì)胞因子。研究表明，CD4+T細(xì)胞分泌的白細(xì)胞介素-21對維持CD8+T細(xì)胞的功能發(fā)揮重要作用。IL-21可增強(qiáng)慢性病毒感染過程中CD8+T細(xì)胞應(yīng)答，在CD4+T細(xì)胞輔助CD8+T細(xì)胞控制感染慢性化中發(fā)揮重要作用。本研究主要完成了以下工作：
　　1不同HBV感染者外周血PBMC中IL-21及Th17細(xì)胞的表達(dá)及其相互關(guān)系的研

3、究及意義
　　為了觀察不同HBV感染者外周血中Th17細(xì)胞和IL-21的表達(dá)情況、相互關(guān)系以及其與臨床指標(biāo)的相關(guān)性，我們采用密度梯度離心法分離76例不同臨床表現(xiàn)的HBV感染者和13例健康對照者的外周血單個核細(xì)胞(PBMC)，流式細(xì)胞術(shù)檢測CD3+CD4+IL-17A+T細(xì)胞亞群（即Th17細(xì)胞）、CD3+CD4+IL-21+T細(xì)胞及CD3+CD4+IL-17A+IL-21+T細(xì)胞的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：
　　1)在無P

4、MA和ionomycin刺激的陰性對照中，產(chǎn)生IL-21和IL-17的CD4+T細(xì)胞很少,約為0.15％和0.08％；PMA+ionomycin刺激可以誘導(dǎo)CD4+T細(xì)胞產(chǎn)生IL-21和IL-17。
　　2)樣本中幾乎檢測不到IL-21+IL-17A+CD4+T細(xì)胞。
　　3)IL-21+CD4+T細(xì)胞比例在急性乙肝組(1.58±1.10％)、乙肝病毒攜帶組(1.80±1.33％)中較正常對照組(0.82±0.70％)和慢重

5、肝組(0.76±0.52％)顯著升高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義，P<0.05；在慢性乙肝組（1.05±0.74％）和非活動性HBsAg攜帶組（1.13±0.65％）較正常對照組和慢重肝組也有所升高，但是差異無統(tǒng)計學(xué)意義。
　　4)Th17細(xì)胞亞群比例在各組間未見統(tǒng)計學(xué)差異。
　　5)除急性乙型肝炎組（r=0.178,P=0.60）外，IL-21+CD4+T細(xì)胞比例與Th17細(xì)胞亞群比例在正常對照組（r=0.787,P=0.001）、

6、乙肝病毒攜帶組（r=0.783,P=0.007）、慢性乙型肝炎組（r=0.699,P=0.001）、非活動性HBsAg攜帶組（r=0.657,P=0.002）、慢性乙型重型肝炎組（r=0.724,P=0.005）組中均有較好的相關(guān)性。
　　6)實驗檢測指標(biāo)與臨床各項指標(biāo)相關(guān)性分析均無統(tǒng)計學(xué)意義。
　　2不同HBV感染者外周血血漿中IL-21、IL-2、IL-4、IL-6、IL-8（CXCL8）、IL-10、IL-17、IFN

7、-γ、TNF-α濃度的檢測
　　為了檢測血漿中IL-21濃度及初步了解Th1、Th2、Treg、Tfh等細(xì)胞亞群與HBV感染后不同臨床表現(xiàn)的關(guān)系，我們收集了122例不同HBV感染者和15例健康對照者新鮮血漿，采用ELISA法檢測IL-21的濃度和多路微球細(xì)胞因子免疫檢測（MultiplexedMicrosphereCytokineImmunoassay）方法檢測IL-2、IL-4、IL-6、IL-8（CXCL8）、IL-10、IL

8、-17、IFN-γ、TNF-α的濃度，單位均為pg/ml。
　　結(jié)果：
　　1)血漿中幾乎檢測不到IL-4、IL-6、IL-10、IL-17、IFN-γ、TNF-α。
　　2)血漿中IL-21、IL-2的濃度在各組見未見統(tǒng)計學(xué)差異。
　　3)趨化因子IL-8（CXCL8）在慢重肝組（60.01±88.10）較正常對照組（7.13±2.49）、急性乙肝組（5.21±1.95）、乙肝病毒攜帶組（3.62±2.27）、