高游離脂肪酸環(huán)境下GLP-1對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞NO生成的影響及機(jī)制.pdf

1、目的:研究胰高血糖素樣肽-1(glucagon-like peptide1，GLP-1)能否緩解棕櫚酸(PA)導(dǎo)致的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(human umbilical veinendothelial cell，HUVECs) NO生成受損，并初步探討其作用機(jī)制。
　　方法:用不同濃度的PA(0，100μM，200μM，400μM，600μM)孵育HUVECs，硝酸酶還原法檢測(cè)培養(yǎng)液NO濃度，Western Blot檢測(cè)eNOS(Se

2、r1177)的磷酸化水平，探討可能引起HUVECs的NO生成明顯受損的PA濃度。用不同濃度的GLP-1(0，1ng/ml，5ng/ml，10ng/ml)孵育HUVECs，檢測(cè)培養(yǎng)液NO濃度，Western Blot檢測(cè)eNOS(Ser1177)的磷酸化水平，摸索GLP-1的最佳有效濃度。用GLP-1干預(yù)PA孵育過(guò)的HUVECs，研究GLP-1能否緩解游離脂肪酸導(dǎo)致的HUVECs的NO生成受損，加或不加PI3K抑制劑，探討其可能的作用機(jī)制

3、。實(shí)驗(yàn)分組如下:①對(duì)照組用含1％BSA的培養(yǎng)液;②PA組加入400μMPA;③PA+GLP-1組加入400μM PA+1ng/ml GLP-1;④PA+GLP-1+LY294002組加入400μM PA+1ng/ml GLP-1+20μM PI3K抑制劑LY294002。各組取培養(yǎng)液測(cè)NO濃度，Western Blot檢測(cè)Akt(Ser473)、eNOS(Ser1177)的磷酸化水平。
　　結(jié)果:(1) HUVECs經(jīng)濃度100μ

4、M、200μM、400μM、600μM的PA孵育后，隨PA濃度升高，培養(yǎng)液NO濃度降低，eNOS(Ser1177)的磷酸化水平下降，PA濃度在200μM或以上時(shí)，與對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05或P＜0.01)。(2) HUVECs經(jīng)濃度1ng/ml、5ng/ml、10ng/ml的GLP-1孵育后，培養(yǎng)液NO濃度增高，eNOS(Ser1177)的磷酸化水平升高，在1ng/ml處最明顯，與對(duì)照度相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05

5、)。(3) HUVECs經(jīng)對(duì)照組、PA組、PA+GLP-1組、PA+ GLP-1+LY294002組干預(yù)后，PA+GLP-1組的培養(yǎng)液NO濃度、Akt(Ser473)、eNOS(Ser1177)的磷酸化水平較PA組均上升(P＜0.05)，但培養(yǎng)液NO濃度、Akt(Ser473)磷酸化水平仍低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);PA+GLP-1+LY294002組的培養(yǎng)液NO濃度、Akt(Ser473)磷酸化水平低于PA+GLP-