游離脂肪酸對非洲綠猴腎細(xì)胞凋亡的影響.pdf

1、游離脂肪酸作為能量代謝來源、細(xì)胞膜生物合成的原料以及細(xì)胞內(nèi)信息轉(zhuǎn)導(dǎo)物質(zhì)(如前列腺素、白細(xì)胞誘素和血小板激活因子等)的前體物質(zhì)，對于細(xì)胞生物功能有重要意義。而生物體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定，不但依賴細(xì)胞增殖和分化，也依賴于細(xì)胞的凋亡。脂肪酸廣泛參與了細(xì)胞與組織的代謝過程，其代謝過程受許多因素的調(diào)節(jié)，脂肪酸的代謝異常將會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞的功能障礙，能夠引起細(xì)胞的凋亡。由于相關(guān)凋亡基因和蛋白的表達(dá)在此過程中發(fā)生了顯著的變化，也證實(shí)了游離脂肪酸的這種作用與細(xì)胞凋亡

2、密切相關(guān)。新近的研究結(jié)果表明，不同種類、結(jié)構(gòu)的脂肪酸對于不同類型細(xì)胞會(huì)產(chǎn)生不同的影響，即使是對于相同細(xì)胞也有不同的作用。臨床疾病如糖尿病等均與脂肪酸異常升高有關(guān)；此外脂肪酸能引發(fā)乳腺癌細(xì)胞等腫瘤細(xì)胞的凋亡。近年來，國內(nèi)外學(xué)者就脂肪酸對細(xì)胞的作用以及可能機(jī)制做了大量的研究。其重要研究目的在于闡明凋亡和疾病的關(guān)系，了解疾病發(fā)病機(jī)理從而應(yīng)用凋亡理論和實(shí)踐來預(yù)防疾病。但目前，國內(nèi)相關(guān)研究報(bào)道尚不多見。本實(shí)驗(yàn)選用非洲綠猴腎(Vero)細(xì)胞作為研究

3、對象，探討脂肪酸對細(xì)胞生長的影響。利用不同種類不同濃度脂肪酸處理體外培養(yǎng)細(xì)胞，利用光鏡觀察細(xì)胞形態(tài)，后經(jīng)Hoechst/PI熒光染色和染色體DNA梯度電泳觀察細(xì)胞形態(tài)改變并確定細(xì)胞凋亡；同時(shí)應(yīng)用蛋白免疫印跡反應(yīng)檢測凋亡相關(guān)Bcl-2、Bax、Fas、P53和Caspase-3蛋白質(zhì)表達(dá)水平。實(shí)驗(yàn)結(jié)果：　　(1)光鏡觀察顯示：細(xì)胞經(jīng)脂肪酸處理后有形態(tài)上的改變，細(xì)胞產(chǎn)生不同程度的破損，這種損壞程度隨脂肪酸濃度遞增而加強(qiáng)?！　?2)Hoe

4、chst/PI染色表明：飽和脂肪酸和不飽和脂肪酸都可劑量依賴性的引起Vero細(xì)胞凋亡。隨濃度升高，PI著色加深，染色質(zhì)邊集；Hoechst著色漸淡。　　(3)DNA凝膠電泳顯示：經(jīng)脂肪酸處理的細(xì)胞DNA呈明顯的梯度分子條帶，表現(xiàn)為典型的凋亡現(xiàn)象，此現(xiàn)象隨處理濃度加大而加重?！　?4)Western-blot分析結(jié)果表明：脂肪酸處理的細(xì)胞中，Bcl-2、Bax、Fas、Caspase-3蛋白表達(dá)量發(fā)生改變，其中Bax、Fas蛋白表達(dá)量