群體感應(yīng)信號(hào)降解酶產(chǎn)生菌的篩選、相關(guān)基因的克隆及其對(duì)細(xì)菌性軟腐病防治研究.pdf

1、群體感應(yīng)(quorum sensing，QS)是一種細(xì)菌細(xì)胞間信號(hào)分子的傳遞機(jī)制，即細(xì)菌可以通過感應(yīng)自身的自體誘導(dǎo)分子(autoinducer，AI)，如N-乙酰高絲氨酸內(nèi)酯(AHLs)的濃度來協(xié)調(diào)細(xì)菌的相關(guān)基因的表達(dá)以此來適應(yīng)多變的自然環(huán)境。許多植物病原細(xì)菌通過群體感應(yīng)系統(tǒng)來調(diào)控毒性基因的表達(dá)，因此群體感應(yīng)系統(tǒng)是潛在的植物病害防治靶標(biāo)。這種對(duì)細(xì)菌QS調(diào)控機(jī)制的干擾和破壞稱為群體感應(yīng)淬滅(quorum quenching，QQ)。

2、>　　本研究采用墊圈法和丁內(nèi)酯平板法自我國(guó)不同地區(qū)采集植物的根圍土壤分離具有降解AHL信號(hào)分子能力的細(xì)菌，采用16S rDNA序列分析對(duì)所分離到的群體感淬滅細(xì)菌進(jìn)行初步分類鑒定。結(jié)果表明墊圈法分離得到約566株細(xì)菌菌株，其中13株具有較強(qiáng)降解信號(hào)分子能力，包括假單胞菌6株、不動(dòng)桿菌5株、變形桿菌1株和Rheinheimera mesophila1株。丁內(nèi)酯平板法分離得到約828株細(xì)菌，其中14株具有較強(qiáng)降解AHL信號(hào)分子能力，包括節(jié)桿菌

3、6株、假單胞菌6株和芽孢桿菌2株。上述結(jié)果表明，雖然墊圈法分離獲得細(xì)菌總數(shù)相對(duì)較少，但比丁內(nèi)酯平板法更易獲得一些新型菌株。
　　從無錫分離得到的菌株WX14降解AHL能力強(qiáng)，且胞內(nèi)和胞外均具有降解活性，16SrDNA初步鑒定結(jié)果為熒光假單胞菌細(xì)菌。利用PCR法從菌株WX14中克隆到hacA和hacB兩個(gè)群體感應(yīng)淬滅酶基因，基因全長(zhǎng)分別為2286bp和2370 bp，采用DNAMAN軟件分析，hacA由761個(gè)氨基酸殘基組成，推測(cè)的

4、分子量為83.7 kDa。hacB由781個(gè)氨基酸殘基組成，推測(cè)的分子量為86.8 kDa。通過氨基酸序列相似性比較，HacA與已報(bào)道的Pseudomonassyringae的Psyr_1971?；D(zhuǎn)移酶相似性可達(dá)62.74％，與Pseudomonas aeruginosa的PvdQ?；D(zhuǎn)移酶相似性達(dá)到54.32％，HacB與已報(bào)道的Pseudomonas syringae Psyr_4858相似性達(dá)到71.13％，與Pseudomon