HGF對(duì)大鼠微小病變腎病模型中ILK表達(dá)的影響.pdf

1、目的：肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子（hepatocyte growth factor，HGF）是一種多效性多肽生長(zhǎng)因子，它能刺激多種上皮和內(nèi)皮細(xì)胞進(jìn)行有絲分裂、運(yùn)動(dòng)，在腎小管形態(tài)發(fā)生、腎臟胚胎的形成、腎組織的損傷修復(fù)和再生中起著非常重要的營養(yǎng)作用。而整合素連接激酶（integrin-linked kinase，ILK）是一種新發(fā)現(xiàn)的粘附蛋白，與整合素β的胞漿區(qū)域相連，是細(xì)胞內(nèi)絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶。它在調(diào)節(jié)細(xì)胞周期、基質(zhì)積聚、腫瘤發(fā)生等中起重要作用，

2、也參與了腎臟疾病的發(fā)生發(fā)展過程。新近的研究表明ILK在足細(xì)胞中表達(dá)水平較高，對(duì)維持腎小球基底膜（glomerular basement membrane，GBM）的完整性、保持腎小球的濾過功能和防止蛋白質(zhì)的漏出有重要意義。本研究主要通過組織病理學(xué)觀察、免疫組化、免疫熒光方法，觀察在微小病變腎?。∕inimal Change Disease，MCD）大鼠體內(nèi)不同時(shí)間點(diǎn)的ILK蛋白水平變化，探討ILK在足細(xì)胞損傷中的意義及其可能機(jī)制，同時(shí)進(jìn)

3、一步探討了HGF干預(yù)時(shí)，微小病變腎病模型中ILK的表達(dá)變化。
　　 方法：
　　 1.微小病變腎?。∕CD）動(dòng)物模型的建立：選取清潔級(jí)雄性SD大鼠72只，隨機(jī)分為三組：對(duì)照組、模型組、肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子干預(yù)組，模型組和肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子干預(yù)組的大鼠經(jīng)尾靜脈一次性注射阿霉素注射液（濃度2mg/ml，7.5mg/kg劑量），復(fù)制MCD模型，肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子干預(yù)組從注射阿霉素后的第三周開始給予腹腔注射肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子（30ug·kg-1·

4、d-1），直至試驗(yàn)結(jié)束；正常對(duì)照組尾靜脈一次性注射等體積的生理鹽水。各組大鼠分別于建模后第7、14、21、28天宰殺，每組各6只，留取腎臟標(biāo)本，處死前于大鼠內(nèi)眥靜脈采血約3ml，離心分離血清測(cè)血漿白蛋白、尿素氮、肌酐、膽固醇。大鼠處死前1天代謝籠收集24小時(shí)尿液，測(cè)24小時(shí)尿蛋白定量。
　　 2.進(jìn)行HE染色，光鏡、電鏡下觀察腎臟病理改變情況。
　　 3．用免疫熒光技術(shù)檢測(cè)ILK蛋白在腎小球的定位分布，分析各組間ILK在

5、不同時(shí)間點(diǎn)的表達(dá)情況，及其與腎小球足細(xì)胞損傷程度間的關(guān)系。
　　 4.采用電泳法測(cè)定血漿白蛋白，采用磺基水楊酸法測(cè)24小時(shí)尿蛋白定量，分析各組間血漿白蛋白、24小時(shí)尿蛋白的變化，以及與ILK的關(guān)系。
　　 結(jié)果：
　　 1.采用尾靜脈一次性注射阿霉素注射液復(fù)制MCD模型成功。
　　 2.模型組大鼠腎小球中ILK蛋白的表達(dá)7天時(shí)減少，但與對(duì)照組相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p>0.05）；14天明顯增加，21天達(dá)

6、到最大值，與對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）。與模型組相比，HGF干預(yù)組大鼠腎小球中ILK蛋白的表達(dá)21天減少，28天明顯減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）；
　　 3.與對(duì)照組相比，模型組大鼠24h尿蛋白的排泄量7天增加，21天達(dá)高峰，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.01）；與模型組相比，HGF干預(yù)組24h尿蛋白的排泄量21天及28天均明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）；
　　 4.與對(duì)照組相比，模型組

7、血清白蛋白7天開始下降，21天降至最低點(diǎn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.01）；與模型組相比，HGF干預(yù)組血清白蛋白在21天及28天均明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）。
　　 5.腎組織形態(tài)學(xué)與病理學(xué)改變：肉眼觀對(duì)照組、干預(yù)組腎臟體積大小正常，顏色深紅，切面皮髓質(zhì)分界清楚。模型組腎臟體積稍大，顏色深紅，切面皮髓質(zhì)分界也清楚。光鏡下可見模型組少數(shù)腎小球體積稍增大，炎細(xì)胞浸潤(rùn)，腎小球毛細(xì)血管可見紅細(xì)胞滲出，近端腎小管可見脂肪變

8、性、脫落，腎小管管腔內(nèi)蛋白管型形成，隨著時(shí)間延長(zhǎng)，病變程度加重，21天時(shí)最明顯。與模型組比，HGF干預(yù)組腎小球體積稍減小，腎小球毛細(xì)血管紅細(xì)胞滲出、炎細(xì)胞浸潤(rùn)減少，近端腎小管上皮細(xì)胞脂肪變性減輕，腎小管蛋白管型減少。電鏡下：模型組可見部分腎小球基底膜裸露，足細(xì)胞的少量脫落，足突大部分融合或消失；HGF干預(yù)組足突融合較模型組有所減輕。
　　 6.相關(guān)分析結(jié)果顯示，模型組ILK表達(dá)的變化與24h尿蛋白定量的變化呈正相關(guān)(r=0.74