鹿藿正丁醇提取物的體外殺精作用及機(jī)制初步探討.pdf

1、第一部分，鹿藿正丁醇提取物的體外殺精子作用
　　目的：實(shí)驗(yàn)研究鹿藿正丁醇提取物(n-Butanol extract of Rhynchosia volubilis Lour,BERVL)體外殺精子作用。
　　方法：室溫下,將50μl正常新鮮精液與200μl不同濃度BERVL混勻。立即顯微鏡下觀測(cè)BERVL與人精液混合后精子活動(dòng)能力的變化。連續(xù)觀察5個(gè)高倍鏡視野,至少計(jì)數(shù)200個(gè)精子,2min內(nèi)計(jì)算有活動(dòng)能力的精子百分率。

2、r>　　結(jié)果：BERVL直接作用于人精子后2min內(nèi),250mg/ml濃度組,顯微鏡下未見(jiàn)任何有活動(dòng)能力精子;125mg/ml濃度組,僅(2.34±1.38)％的精子存在原地活動(dòng)能力;100mg/ml濃度組,約(2.41±1.19)%的精子存在原地活動(dòng)能力;90mg/ml濃度組,有(4.73±3.23)%的精子尚存在原地活動(dòng)能力;62.5mg/ml濃度組,約(36.72±19.87)%的精子存在原地和前向活動(dòng)能力。
　　結(jié)論：BE

3、RVL具有較好的體外殺精子作用。不同濃度的殺精子作用不同,90mg/ml的BERVL與人精液混合后,2min內(nèi)未見(jiàn)任何前向活動(dòng)的精子,提示90mg/ml可能是最為理想的體外殺精子濃度。
　　第二部分，鹿藿正丁醇提取物體外對(duì)乳酸桿菌作用
　　目的：研究BERVL體外對(duì)嗜酸乳酸桿菌的影響,初步評(píng)估BERVL作為外用避孕藥的可能性。
　　方法：瓊脂稀釋法:選取直徑為60mm的培養(yǎng)皿,將制備好的嗜酸乳桿菌CGMCC1.1854

4、單細(xì)菌懸液100μl與200μl不同濃度的BERVL混勻,加入適量MRS瓊脂,放置37℃孵育箱孵育18h~24h后觀察菌落生長(zhǎng)情況;試管稀釋法:選取15ml的有蓋試管,編號(hào)并加入4800μlMRS培養(yǎng)液,將200μl不同濃度BERVL藥液的和嗜酸乳桿菌CGMCC1.1854單細(xì)菌懸液100μl加入試管,充分混勻后,放置37℃孵育箱孵育18-24h后觀察抑菌情況。
　　結(jié)果：不同濃度的BERVL對(duì)嗜酸乳桿菌存在不同程度的抑制作用。瓊

5、脂稀釋法:500,250,125,100,90及62.5mg/ml濃度組,被抑制生長(zhǎng)的嗜酸乳桿菌百分率分別為:100%,89.15%,47.99%,40.97%和32.96%;試管稀釋法:500,250,125,100,90及62.5mg/ml濃度組,被抑制生長(zhǎng)的嗜酸乳桿菌百分率分別為:100%,100%,50%,45.54%,35.7%和21.4%。
　　結(jié)論：無(wú)論是試管稀釋法還是瓊脂稀釋法結(jié)果都顯示BERVL對(duì)嗜酸乳桿菌CGM

6、CC1.1854存在抑制作用,且存在明顯的劑量相關(guān)性。
　　第三部分，鹿藿正丁醇提取物的體外殺精子作用機(jī)制
　　大多植物提取物的抗生育作用都是通過(guò)與精細(xì)胞脂蛋白膜相互作用,而起到抑制及殺傷精子作用。精子凋亡是可以發(fā)生在精子生成、成熟及體外環(huán)境過(guò)程中的重要現(xiàn)象。因此,本部分通過(guò)伊紅Y水試驗(yàn)檢測(cè)BERVL對(duì)精子膜功能的影響和免疫熒光染色檢測(cè)BERVL對(duì)精子凋亡的影響,初步探討其體外殺作用機(jī)制。
　　實(shí)驗(yàn)一，伊紅Y水試驗(yàn)

7、r>　　目的：通過(guò)檢測(cè)BERVL直接作用于人精子后,對(duì)精子膜的影響,來(lái)探討B(tài)ERVL體外殺精子作用機(jī)制。
　　方法：將200μl濃度為125,100及90mg/ml的BERVL藥液分別與10份不同精液標(biāo)本50μl混勻,然后將精液與伊紅Y水溶液按1:1混勻后,取一滴于載玻片上,蓋上蓋玻片,連續(xù)觀測(cè)5高倍鏡視野,至少計(jì)數(shù)200個(gè)精子,觀測(cè)精子的頭部染色及尾部腫脹情況,并計(jì)算精子頭部未著色百分率和尾部腫脹百分率。
　　結(jié)果：生理鹽

8、水對(duì)照組,125,100及90mg/ml濃度組,精子頭部未著色百分率分別為(81.44±5.71)%,(6.24±3.31)%,(5.21±3.91)%和(7.85±4.71)%;精子尾部腫脹百分率為(97.50±10.13)%,(83.49±7.05)%,(93.96±6.62)和(92.74±9.43)%。
　　結(jié)論：BERVL體外直接作用于人精子時(shí),精子頭部未著色百分率和尾部腫脹百分率都較對(duì)照組低(P<0.05),表明BER

9、VL對(duì)精子膜有較強(qiáng)的破壞作用。精子頭部未著色百分率下降程度顯著高于精子尾部腫脹百分率(P<0.05),表明BERVL對(duì)精子頭膜的作用較強(qiáng),能快速破壞精子頭膜,致精子死亡。
　　實(shí)驗(yàn)二，Hochst33342/PI雙染精子凋亡的檢測(cè)
　　目的：通過(guò)檢測(cè)BERVL與精子混合后,對(duì)精子凋亡的影響,探討B(tài)ERVL體外殺精子作用機(jī)制。
　　方法：將200μl濃度為125、100及90mg/ml的BERVL藥液分別與10份不同精液

10、標(biāo)本50μl混勻。將含有BERVL藥液的精子懸液與Hochst33342/PI按1:1混勻,避光染色3-5min后,熒光顯微鏡紫外光激發(fā)下觀測(cè)精子染色后情況,正常精子呈淡藍(lán)色,核圓形,早中期凋亡精子呈亮藍(lán)色,核分葉或碎裂;晚期凋亡及死精子呈紅色。并計(jì)算正常精子百分率、早中期凋亡精子百分率和晚期凋亡及死亡精子率。
　　結(jié)果：生理鹽水對(duì)照組,125mg/ml,100mg/ml及90mg/ml濃度組,正常精子百分率分別為(94.46±5

11、.11)%,(3.29±2.00)%,(3.53±3.35)%和(5.01±2.71)%;早中期凋亡精子百分率(2.64±1.31)%,(6.09±2.08)%,(5.65±3.71)%和(4.98±2.27)%;晚期凋亡及精子死亡百分率為(2.89±2.54)%,(90.12±3.54)%,(90.91±4.40)%和(90.11±4.51)%。
　　結(jié)論：BERVL直接作用于精子后,正常精子率顯著降低(P<0.05),早中期精