杜氏藻提取物防治腫瘤作用的初步探討.pdf

1、目的：杜氏藻(Dunaliella salina)由于其胡蘿卜素含量高，具有抗衰老、防癌抗癌、降低心血管病發(fā)生率、美容護(hù)膚以及補(bǔ)充維生素A等功能，因此杜氏藻中所含β-胡蘿卜素是目前杜氏藻研究開發(fā)的熱點(diǎn)，但是杜氏藻中其他類化合物(除多糖外)的生物活性目前國內(nèi)外尚未見報(bào)道。本試驗(yàn)的研究的目的在于探求杜氏藻中除β-胡蘿卜素和多糖外是否還含有其他防治腫瘤的活性成分，為杜氏藻得到更充分的開發(fā)利用打下基礎(chǔ)。
　　 方法：①杜氏藻提取物的制備

2、：將杜氏藻糊經(jīng)蒸餾水洗滌去除鹽分，避光條件下干燥并研制成粉。將干燥的杜氏藻粉依次用石油醚→氯仿→乙酸乙酯→丙酮→乙醇→水回流提取，按極性由小至大得到六個部分的提取物，水提物經(jīng)乙醇沉淀(水/無水乙醇1:5，V/V)后，得到兩種樣品；氯仿提取物經(jīng)硅膠色譜柱分離純化去除β-胡蘿卜素后，得到三種樣品，總共得到A、B2、B3、B4、C、D、E、F1、F2九個供實(shí)驗(yàn)用的樣品。②樣品抗腫瘤活性評價(jià)：采用MTT法測定樣品對腫瘤細(xì)胞(小鼠腫瘤U14和S1

3、80，人腫瘤細(xì)胞A549和Hela)細(xì)胞毒活性，評價(jià)指標(biāo)為樣品的IC50；③樣品免疫活性評價(jià)：采用體外ConA誘導(dǎo)的淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn)，評價(jià)指標(biāo)為對淋巴細(xì)胞增殖的促進(jìn)(或抑制)率；④樣品減毒作用評價(jià)：采用腫瘤化療藥物表阿霉素殺傷骨髓細(xì)胞的體外試驗(yàn)?zāi)Ｐ?，觀察樣品對化療藥物殺傷骨髓細(xì)胞的保護(hù)作用，評價(jià)指標(biāo)為骨髓細(xì)胞存活率；⑤樣品化療增效作用的評價(jià)：以體外腫瘤細(xì)胞增殖抑制試驗(yàn)為基礎(chǔ)，觀察樣品與化療藥物表阿霉素、順鉑合用后對腫瘤細(xì)胞抑制率的影響，

4、評價(jià)指標(biāo)為抑瘤率及Q值；⑥防癌作用的評價(jià)：采用Ames試驗(yàn)，選擇TA98為測試菌株，以化療藥物阿霉素為陽性誘變劑，以阿霉素產(chǎn)生誘變作用并在此基礎(chǔ)上觀察樣品有無抗誘變作用，以MR值為評價(jià)指標(biāo)。
　　 結(jié)果：①600g杜氏藻糊經(jīng)洗滌去除鹽分得到131.1g杜氏藻干粉。提取物A、B(β-胡蘿卜素及B2、B3、B4)、C、D、E及F(F1及F2)的收率分別為5.19％、10.53％、0.92％、0.38％、4.27％、11.67％。經(jīng)紫

5、外分光光度法和薄層色譜法分析提取物B中含β-胡蘿卜素，經(jīng)柱色譜分離得到β-胡蘿卜素146.2mg。②杜氏藻各部分提取物對小鼠U14、S150及人A549、Hela腫瘤細(xì)胞珠均有不同程度的細(xì)胞毒作用，在一定濃度范圍內(nèi)基本上保持明確的量效關(guān)系。其中A、B3顯示出較強(qiáng)的細(xì)胞毒活性，F(xiàn)1、F2無細(xì)胞毒活性(IC50>1.0mg/mL)。③杜氏藻各部分提取物對ConA誘導(dǎo)的小鼠脾淋巴細(xì)胞(主要是T淋巴細(xì)胞)的增值表現(xiàn)出了明確的抑制作用，其對淋巴細(xì)

6、胞增殖的抑制作用基本上呈劑量依賴性。④提取物B4與C均對阿霉素所致小鼠骨髓細(xì)胞的損傷具有一定的保護(hù)作用，其中C的作用優(yōu)于B4，提取物C終濃度為2.5、5、10、20、40μg/mL時(shí)可對抗阿霉素對骨髓細(xì)胞的殺傷作用，使骨髓細(xì)胞的生存率由47.46％分別提高到57.62％、55.11％、60.35％、56.71％、57.85％(P均小于0.05)。⑤杜氏藻提取物A及B3與順鉑合用對U14腫瘤細(xì)胞的抑制作用具有協(xié)同效應(yīng)(Q>1.15)，但兩

7、種樣品與表阿霉素合用對小鼠U14細(xì)胞抑制無明顯協(xié)同作用(Q=0.93～1.05)，而對小鼠S180細(xì)胞表現(xiàn)出一定的拮抗作用(Q<0.85)。⑥杜氏藻提取物F1，其測試濃度為0.1、1.0、10.0μg/皿時(shí)，能對抗阿霉素對TA98菌株的誘變作用，其誘變抑制率分別為53.38、94.79、66.07％。其中目的低、中、高劑量組與阿霉素誘變組相比，差異均有顯著性(P<0.05)。
　　 結(jié)論：杜氏藻中除β-胡蘿卜素和多糖外還含有其他