牛蒡根提取物防治腫瘤作用的初步評(píng)價(jià).pdf

1、目的:牛蒡(ArctiumlappaL.)是菊科牛蒡?qū)僦参?。其果?shí)牛蒡子為我國(guó)的法定藥物,其根則作為食品,由于具有潛在的“防癌作用”而在日本受到歡迎。上個(gè)世紀(jì)60年代,日本學(xué)者曾經(jīng)在牛蒡根中提取獲得了多炔類化合物,而近來的研究表明多炔類化合物很可能具有抗腫瘤的生物活性。本試驗(yàn)研究的目的在于探求牛蒡根中是否具有防治腫瘤的活性成分,為進(jìn)一步深入研究開發(fā)牛蒡根打下基礎(chǔ)。
　　 方法:①牛蒡根的生藥學(xué)鑒定采用常規(guī)感官法及顯微鑒別法。化學(xué)

2、成分鑒別采用薄層色譜法,以氯仿-甲醇-水(40:8:1)為展開劑,置紫外燈(254nm)下檢視。試驗(yàn)用樣品制備采用液-液分配萃取法。牛蒡根切片,室溫陰干,以95％乙醇提取,回收溶劑。醇浸膏水混懸后,依次以石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取,連同萃取后的水層(及混懸物)分別回收溶劑,得到相應(yīng)不同極性的五部分樣品。②樣品抗腫瘤活性評(píng)價(jià)采用MTT法體外腫瘤細(xì)胞(小鼠腫瘤HepA和S180)增殖抑制試驗(yàn),評(píng)價(jià)指標(biāo)為樣品的IC50；③樣品免疫活性

3、評(píng)價(jià)采用體外ConA誘導(dǎo)的淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn),評(píng)價(jià)指標(biāo)為對(duì)淋巴細(xì)胞增殖的促進(jìn)(或抑制)率；④樣品減毒活性評(píng)價(jià)采用體外腫瘤化療藥物阿霉素、順鉑殺傷骨髓細(xì)胞的體外試驗(yàn)?zāi)Ｐ?觀察樣品對(duì)殺傷骨髓細(xì)胞的保護(hù)作用；⑤樣品化療增效作用的評(píng)價(jià)以體外腫瘤細(xì)胞增殖抑制試驗(yàn)為基礎(chǔ),觀察合用樣品后對(duì)化療藥物阿霉素IC50的影響；⑥防癌作用的評(píng)價(jià)采用Ames試驗(yàn),選擇TA98測(cè)試菌株,選擇化療藥物阿霉素為陽(yáng)性誘變劑,以阿霉素產(chǎn)生誘變作用并在此基礎(chǔ)上觀察樣品有無抗誘

4、變活性。
　　 結(jié)果:①牛蒡根鮮品為肉質(zhì)根圓柱型,皮黑褐色,有皺紋。肉質(zhì)灰白色,味微苦而性粘。鮮品的含水量約為83.60％。顯微鏡下細(xì)部特征為木栓層為數(shù)列細(xì)胞,皮層較寬,韌皮部呈長(zhǎng)三角形,韌皮射線寬廣；形成層明顯；木質(zhì)部導(dǎo)管較多,呈放射狀排列,無髓；中心附近裂隙多見?；瘜W(xué)成分分析表明牛蒡根中不含牛蒡子中特有抗癌活性成分牛蒡苷。石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇及水層提取物的收率分別為0.20％、0.18％、0.40％、4.08％、1

5、3.55％。
　　 ②牛蒡根各部分提取物對(duì)小鼠HepA、S180腫瘤細(xì)胞均有不同程度的細(xì)胞毒作用,在一定濃度范圍內(nèi)基本上保持明確的量效關(guān)系。牛蒡根石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇、水提取物對(duì)肝癌HepA細(xì)胞的IC50分別為25.97、30.62、40.67、81.80、988.81μg/mL。對(duì)小鼠S180細(xì)胞的IC50分別為9.42、13.30、50.71、32.18、2395.80μg/mL。其中石油醚、氯仿、提取物顯示出較強(qiáng)

6、的細(xì)胞毒作用,水提取物的細(xì)胞毒作用很低。
　　 ③牛蒡根各部分提取物對(duì)ConA誘導(dǎo)的小鼠脾淋巴細(xì)胞(主要是T淋巴細(xì)胞)的增值表現(xiàn)出了明確的抑制作用,其對(duì)淋巴細(xì)胞增殖的抑制作用基本上呈劑量依賴性。牛蒡根石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇、水提取物對(duì)淋巴細(xì)胞增殖抑制的IC50分別為26.67、28.68、27.26、156.88、629.23μg/mL。
　　 ④牛蒡根正丁醇提取物與水提取物均可對(duì)阿霉素所致小鼠骨髓細(xì)胞的損傷具有

7、一定的保護(hù)作用,其中正丁醇提取物的作用稍優(yōu)于水提取物,正丁醇提取物濃度為10、40μg/mL時(shí)可明確對(duì)抗阿霉素對(duì)骨髓細(xì)胞的殺傷作用,提高骨髓細(xì)胞的存活率細(xì)胞存活率由41.71％提高到45.07％、49.40％(P<0.05)。樣品濃度為2.5μg/mL可明確降低順鉑所致骨髓細(xì)胞毒作用。細(xì)胞存活率有61.78％提高到66.59％(P<0.05)。牛蒡根水提取物對(duì)順鉑所致骨髓細(xì)胞損傷的保護(hù)作用較弱,僅在低劑量(2.5μg/mL)時(shí)表現(xiàn)出一定

8、的保護(hù)作用。
　　 ⑤牛蒡根石油醚提取物(3μg/mL)、氯仿提取物(3μg/mL)同阿霉素合用后,阿霉素對(duì)小鼠HepA腫瘤細(xì)胞的IC50分別為3.76、3.11μg/mL與單用阿霉素IC50(4.69μg/mL)相比有所降低,但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。而乙酸乙酯提取物(5μg/mL)同阿霉素合用后,阿霉素對(duì)小鼠HepA腫瘤細(xì)胞毒的IC50提高到5.39μg/mL,亦無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 ⑥牛蒡根正丁醇提取物及水提物,其測(cè)試濃度為

9、0.1、1.0、10.0μg/mL時(shí),均能減低阿霉素對(duì)TA98菌株的誘變作用,其誘變抑制率分別為31.15、65.41、69.78％和34.43、60.93、67.25％,表現(xiàn)出一定的量效關(guān)系。其中正丁醇提取物的中、高劑量組及水提物的中、高劑量組與阿霉素組相比,差異有顯著性(P<0.05),顯示出它們對(duì)阿霉素的誘變有中度抑制作用。
　　 結(jié)論:牛蒡根和牛蒡子的化學(xué)成分存在差異,前者不含有已知具有抗腫瘤活性的化學(xué)物質(zhì)牛蒡苷。牛蒡根