中藥復方優(yōu)精顆粒治療精子形態(tài)異常的機制研究.pdf

1、目的:不育癥是男科學研究的主要內(nèi)容之一，精子畸形與男性不育密切相關。本次研究采用甲基磺酸甲酯(methyl methanesulphonate，MMS)制造精子形態(tài)異常大鼠模型。研究優(yōu)精顆粒對模型大鼠精子形態(tài)、密度、活率的影響，研究相關基因、蛋白的表達;并從內(nèi)分泌、氧化應激角度探討其作用機制。
　　方法:SD大鼠48只，隨機分正常對照組、MMS組、優(yōu)精顆粒低、中、高劑量組、維生素E組共6組，每組8只。除正常組外，其余40只大鼠均先

2、用MMS給大鼠灌胃，連續(xù)5天，制造出精子形態(tài)異常大鼠模型。之后給予維生素E及優(yōu)精顆粒（分低、中、高劑量給藥）治療，連續(xù)48天，與此同時，正常組大鼠給予等量的大鼠飲用水灌胃。第49天，水合氯醛腹腔注射麻醉，摘取大鼠睪丸和附睪，心尖部取血備用。
　　然后進行以下內(nèi)容的檢測:
　　1，檢測各組大鼠附睪的精子濃度、活率和精子形態(tài);
　　2，取一側睪丸進行石蠟切片，在光學顯微鏡下觀察各組大鼠睪丸組織的形態(tài)學改變;
　　3，

3、檢測各組大鼠血清睪酮水平;
　　4，檢測各組大鼠血清氧化應激指標;
　　5，用RT-PCR方法檢測各組大鼠睪丸組織中生殖相關（精子發(fā)生、精子形態(tài)）基因的表達差異;
　　6，用免疫組化方法檢測Vasa、Plzf、 Sycp3、Sox9在各組大鼠睪丸組織中的表達。
　　結果:與正常對照組相比: MMS組大鼠附睪的精子濃度與活率明顯下降，精子畸形率明顯升高;光鏡下生精小管退化，各級生精細胞數(shù)量減少、層次不清晰;血清睪酮

4、水平明顯降低;血清氧化指標（超氧陰離子、羥基自由基）明顯升高，抗氧化指標（超氧化物歧化酶、谷胱甘肽過氧化物酶）明顯降低;RT-PCR顯示，睪丸組織中生殖細胞細胞相關基因Vasa、Dazl表達明顯降低，精子細胞階段相關蛋白Acrosin的表達也明顯降低;免疫組化顯示，睪丸組織中生殖細胞相關基因Vasa表達的量也明顯減少。
　　與MMS組比較:優(yōu)精顆粒低、中、高劑量組大鼠附睪的精子濃度與活率均顯著增加，精子畸形率顯著降低。在與MMS組

5、比較中:維生素E組、及優(yōu)精顆粒組在精子濃度、活率、精子畸形率、光鏡下睪丸曲細精管組織、氧化應激指標、睪丸組織中Vasa、Dazl、Acrosin的表達等各方面均有顯著差異。
　　與VE組比較:優(yōu)精顆粒組大鼠在精子活率、精子畸形率、光鏡下曲細精管組織、血清睪酮、睪丸組織中Vasa、Dazl、Acrosin的表達的量這幾個方面均占明顯優(yōu)勢。
　　結論:MMS可以造成精子形態(tài)異常的大鼠模型。MMS對于整個生精過程中的后期（即精細胞

6、形成及精子成熟過程）有一定的影響，從而導致畸形精子增加，同時引起大鼠精子數(shù)量、活率等降低，而VE對于其有一定的修復功能。
　　優(yōu)精顆粒對于MMS致畸的修復能力要優(yōu)于VE，從而可以更好地提高（或降低）各項指標，且無論VE或者優(yōu)精顆粒，其對血睪屏障都沒有影響，會順利通過血睪屏障而發(fā)揮作用。
　　優(yōu)精顆?？梢悦黠@提高模型大鼠生殖細胞相關基因Vasa、Dazl的表達，明顯提高與精細胞階段相關基因Acrosin的表達。我們推測，優(yōu)精顆