畸形精子癥精液的處理方法及精子形態(tài)對輔助生殖技術(shù)治療結(jié)局影響的研究.pdf

1、前言
　　在不孕夫婦中,男性因素導(dǎo)致的不孕約為25~40％。因此,精液質(zhì)量越來越引起人們的重視。精液參數(shù)是反映精液質(zhì)量的重要指標(biāo),而精子形態(tài)則是精液參數(shù)的一個重要組成部分。精子形態(tài)在評估精子受精能力及預(yù)測輔助生殖技術(shù)治療結(jié)局方面,也發(fā)揮了很大作用。世界衛(wèi)生組織(World Health Organization,WHO)規(guī)定,一份精液中形態(tài)異常精子比例>70%,即為畸形精子癥。精子形態(tài)越差,其自然妊娠的能力就越低。有些畸形精子癥患

2、者,往往需要采用輔助生殖技術(shù)來滿足其生育要求。因此,我們不僅需要對精子形態(tài)做出準(zhǔn)確的評估,還需要找到適合畸形精子癥患者合適的精液處理方法及輔助生殖技術(shù),以期改善其生育結(jié)局。
　　目的
　　尋找適合臨床檢驗需要的簡便快速準(zhǔn)確的精子形態(tài)學(xué)染色方法,以利于對精子進行形態(tài)學(xué)評估;尋求適合畸形精子癥患者精液的處理方法及輔助生殖技術(shù),以提高此類患者的臨床妊娠率。具體為:
　　1.比較瑞氏-姬姆薩染色法(Wright-Giemsa

3、stain)與WHO推薦的巴氏染色法(Papanicolaou stain)對精子形態(tài)染色評估的效果,希望找到可替代巴氏染色法的較為簡單、有效的精子形態(tài)染色方法。
　　2.比較臨床上常用的兩種精液處理方法 Percoll梯度離心聯(lián)合上游法及直接上游法對畸形精子癥精液的處理效果,試圖找到適合此類患者的精液處理方法。
　　3.評估精子形態(tài)對不同輔助生殖技術(shù)的受精率、卵裂率和優(yōu)質(zhì)胚胎率的影響,以便找到適合畸形精子癥患者的合適的輔助

4、生殖技術(shù)。
　　方法
　　1.分別采用瑞氏-姬姆薩染色法和巴氏染色法對精液涂片進行染色,分析兩種染色方法的結(jié)果。
　　2.采用計算機輔助精子分析儀(computer assisted semen analysis,CASA)、精子形態(tài)染色、吖啶橙染色和流式細胞儀(flow cytometry,FCM)分別檢測兩種方法即Percoll梯度離心聯(lián)合上游法和直接上游法處理前后常規(guī)精液參數(shù)、畸形精子比例及處理后精子核 DNA成

5、熟度、精子頂體完整性、線粒體膜電位和精子細胞內(nèi)活性氧類物質(zhì)(reactive oxygen species,ROS)含量的變化。
　　3.比較分析精子形態(tài)對常規(guī)體外受精(in vitro fertilization, IVF)和卵胞漿內(nèi)單精子注射(intracytoplasmic sperm injection,ICSI)的受精率、卵裂率和優(yōu)質(zhì)胚胎率的影響。
　　結(jié)果
　　1.兩種染色方法對精子形態(tài)的評估,結(jié)果無統(tǒng)計學(xué)

6、差異(P>0.05);且對正常形態(tài)精子和異常形態(tài)精子的評估分別具有正相關(guān)性,相關(guān)系數(shù)依次為0.984,0.968(P<0.01)。
　　2.處理后,a級精子、a+b級精子比例比處理前有明顯升高,精子畸形率降低,且percoll梯度離心聯(lián)合上游法優(yōu)于直接上游法,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(依次分別為:34.8±11.2%vs57.4±13.7%,61.4±12.8%;53.7±5.8%vs81.7±6.2%,85.7±5.7%;78.8±8

7、.2%vs70.2±12.0%,64.3±11.5%,P<0.01)。優(yōu)選精液中雙鏈 DNA精子的比例直接上游法高于 percoll梯度離心聯(lián)合上游法(72.0±20.3%vs68.9±20.6%,P<0.01);而精子細胞內(nèi)ROS含量則前者高于后者(146.7±65.2 vs142.0±61.8,P<0.05)。關(guān)于精子頂體完整性和線粒體膜電位,兩種處理方法無顯著差異(P>0.05)。
　　3.在IVF治療組中,正常形態(tài)組的受精

8、率高于畸形精子組的受精率(0.72±0.21 vs0.55±0.29),且差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);正常形態(tài)組的卵裂率和優(yōu)質(zhì)胚胎率也高于畸形精子組,但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。而在 ICSI治療組中,兩種形態(tài)精子的受精率、卵裂率和優(yōu)質(zhì)胚胎率間的差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。另外,在正常形態(tài)組中,兩種助孕方法的受精率、卵裂率和優(yōu)質(zhì)胚胎率之間的差異,無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。在畸形精子組,ICSI組的受精率比 IV

9、F組的受精率高(0.72±0.20 vs0.55±0.29),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);卵裂率和優(yōu)質(zhì)胚胎率,雖然ICSI組也高于IVF組,但兩者間的差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
　　結(jié)論
　　1.瑞氏-姬姆薩染色法對精子形態(tài)的評估效果與巴氏染色法比較無顯著差異,且前者較簡便、省時、快速、經(jīng)濟,因此可用瑞氏-姬姆薩染色法替代巴氏染色法來進行精子形態(tài)學(xué)的評估。
　　2.Percoll梯度離心聯(lián)合上游法及直接上