中藥復方GM治療骨質疏松癥的實驗研究及其機制初探.pdf

1、骨質疏松是一種以全身性骨量減少和骨組織微細結構破壞為特征繼而導致骨脆性增加和骨折危險性增高的骨骼疾病，與機體骨吸收和骨形成這一對矛盾體失衡有關，造成這種失衡的原因，則與全身性多環(huán)節(jié)紊亂有關，是一種增齡性退行性改變在骨骼系統(tǒng)的反應。 GM 是以嶺醫(yī)藥研究院正在研發(fā)的一個治療骨質疏松癥的中藥復方制劑，主要藥物組成為淫羊藿、菟絲子等。實驗通過去除雙側卵巢制備大鼠骨質疏松模型，模擬臨床絕經后骨質疏松，觀察GM對骨質疏松的治療作用，并對其

2、作用機制進行初步探討。 目的： 采用雙側卵巢切除致大鼠骨質疏松(OVX)的動物模型，觀察GM對OVX大鼠體重、子宮、肝腎功能、骨形態(tài)計量學指標、骨密度、骨生物力學等指標的影響，探討其對OVX大鼠骨質疏松的作用及可能的機制，為本制劑的研發(fā)與臨床應用提供參考依據。 方法： 將85只四月齡SD雌性大鼠按體重隨機分為6組。假手術組(Sham)10只；模型組(OVX)、己烯雌酚組(DES)、GM低劑量組(GML)、

3、GM中劑量組(GMM)、GM高劑量組(GMH)各15只。除假手術組外，其余行雙側卵巢切除術。假手術組和模型組給溶劑對照。所有動物均在手術后第二天開始灌胃給藥，每天一次，連續(xù)90天。OVX組與Sham組灌胃0.5％CMC-Na，DES組灌胃己烯雌酚25μg/kg·d，GM低、中、高劑量組分別按1.92g生藥/kg·d、3.84 g生藥/kg·d、7.68 g 生藥/kg·d灌胃。所有大鼠在處死前第18d和第3d分別腹腔注射鹽酸四環(huán)素30m

4、g/kg進行熒光標記。大鼠麻醉后取血，測定血清鈣(Ca)、磷(P)、堿性磷酸酶(ALP)、門冬氨酸氨基轉移酶(AST)、丙氨酸氨基轉移酶(ALT)、尿素氮(BUN)、肌酐(CRE)、雌二醇(E2)、骨鈣素(BGP)、抗酒石酸酸性磷酸酶(StrACP)；取子宮、肝、脾、腎、腎上腺、胸腺器官稱濕重，計算其重量指數(shù)，10％甲醛溶液組織固定，石蠟包埋，切片，常規(guī)HE染色，觀察各器官組織形態(tài)學變化并測量子宮內膜厚度。處死后取左側脛骨上段進行不脫鈣

5、骨組織形態(tài)計量學分析；取左側股骨測定骨密度(BMD)；取右側股骨及第五腰椎進行生物力學分析。 結果： 1.GM對OVX大鼠體重的影響： 實驗開始第0周、2周、4周、6周、8周、10周、12周體重變化趨勢顯示，OVX大鼠體重增長迅速，而GM可以有效降低OVX大鼠體重。 2.GM對OVX大鼠肝腎功能的影響： 各組與OVX組比較，血清ALP、AST、ALT、BUN、CRE無明顯統(tǒng)計學差異。 3.

6、GM對OVX大鼠臟器指數(shù)、組織形態(tài)學的影響： GM三個劑量組與OVX組比，肝、脾、腎、腎上腺、胸腺臟器指數(shù)無明顯統(tǒng)計學差異；各組組織形態(tài)學觀察無異常。 4.GM對OVX大鼠骨代謝的影響： OVX組BGP明顯升高，為1.37±0.34ng/ml，DES組為0.91±0.18ng/ml、GM低劑量組為1.02±0.15ng/ml，以上兩組與均能明顯降低BGP含量(p<0.01或p<0.05)。OVX組StrACP活性

7、明顯升高為12.84±2.62U/L，DES組為8.42±2.59U/L，GML組為3.16±1.20 U/L、GMM組為4.43±2.54U/L、GMH組為8.55±0.76U/L，各組均能顯著降低StrACP活性(p<0.01或p<0.05)。 5.GM對OVX大鼠左側脛骨骨形態(tài)計量學的影響： 大鼠切除卵巢后，作為骨量主要標志的脛骨TBV％(骨小梁體積百分比)顯著降低，而代表骨吸收參數(shù)的TRS％(骨小梁吸收表面百分比

8、)以及代表骨形成參數(shù)的TFS％(骨小梁形成表面百分比)、AFS％(活性生成表面百分比)、MAR(骨小梁礦化率)、MOSW(類骨質平均寬度)、mAR(骨皮質礦化率)皆顯著增高(p<0.01)，表明卵巢切除所造成的是一種骨吸收大于骨形成的高轉換型骨質疏松模型，這與國內外的報道相一致。陽性藥物與模型組比較骨形態(tài)學計量學各項指標均有非常顯著的統(tǒng)計學差異(p<0.01)，說明陽性藥物己烯雌酚對去卵巢大鼠所致骨質疏松有治療作用。GM各治療組與模型組

9、比較骨形態(tài)學計量學各項指標顯示其對卵巢切除所致的骨質疏松癥具有治療作用，尤以低劑量組明顯(p<0.01或p<0.05)。 6.GM對OVX大鼠骨密度的作用： 大鼠左側股骨骨密度結果顯示，OVX大鼠骨密度降低，為0.380±0.014g/cm2。GML組、GMM組與之相比骨密度明顯升高(P＜0.05)，分別為0.400±0.012 g/cm2、0.399±0.021g/cm2。 7.GM對OVX大鼠右側股骨及第五腰

10、椎骨生物力學的影響： OVX組大鼠右側股骨最大載荷為82.58±17.71 牛頓，Sham組為102.54±12.67牛頓，兩組相比有明顯統(tǒng)計學差異(P＜0.05)；DES組最大載荷為98.35±12.35牛頓，GML組為101.78±6.72牛頓、GMH組為97.51±15.29牛頓，與OVX組相比最大載荷明顯升高(P＜0.05)；而抗彎強度、彈性載荷、最大撓度各組間無明顯統(tǒng)計學差異，但數(shù)據趨勢顯示出了GM對以上骨生物力學各項

11、指標的改善作用。從第五腰椎所能承受的最大壓縮力來看，OVX大鼠腰椎的最大壓縮力最低(343.37±83.18牛頓)，與Sham組(444.41±65.85牛頓)比較有明顯統(tǒng)計學差異(P＜0.05)，GML組(447.34±53.47牛頓)和GMH組(425.77±90.62牛頓)可明顯提高最大壓縮力(P＜0.05)。 8.GM對OVX大鼠雌激素水平與子宮的影響： 子宮臟器指數(shù)結果顯示，Sham組(01.28+0.13)、

12、DES組(0.30±0.07)、GML組(0.16±0.12)、GMH組(0.14±0.14)與模型組(0.09±0.09)相比有顯著差異(P＜0.01或P＜0.05)。OVX組子宮內膜變薄，子宮內膜平均厚度為5.2±1.91μm，Sham組(8.1±1.91μm)、DES組(8.7±1.7μm)與之相比P＜0.01。GMH組(4.6±2.7μm)、GMM組(4.7±2.1μm)、GML組(6.0±3.1μm)與模型組子宮內膜厚度沒有明