重組凋亡素真核表達(dá)質(zhì)粒特異性誘導(dǎo)人卵巢癌細(xì)胞凋亡研究.pdf

1、目的:探討凋亡素基因表達(dá)對正常卵巢細(xì)胞和人卵巢癌細(xì)胞凋亡的影響.方法:將凋亡素基因克隆入真核表達(dá)載體pcDNA3.1(+),構(gòu)建重組凋亡素真核表達(dá)載體pcDNA3.1-VP3.通過限制性內(nèi)切酶分析及測序鑒定載體結(jié)構(gòu).采用LipofectamineTM2000介導(dǎo)的基因轉(zhuǎn)染法,在體外將pcDNA3.1(+)、pcDNA3.1-VP3分別轉(zhuǎn)染入中國倉鼠卵巢細(xì)胞CHO-K1和人卵巢癌細(xì)胞CoC1及CoC1細(xì)胞耐藥亞株CoC1/DDP中,設(shè)未轉(zhuǎn)

2、染細(xì)胞進(jìn)行空白對照.RT-PCR檢測凋亡素在細(xì)胞中的表達(dá).AO染色法和流式細(xì)胞儀檢測凋亡素對CHO-K1、CoC1、CoC1/DDP三株細(xì)胞凋亡的影響.結(jié)論:(1)重組凋亡素真核表達(dá)載體pcDNA3.1-VP3構(gòu)建成功.(2)在轉(zhuǎn)染細(xì)胞中凋亡素基因在轉(zhuǎn)錄水平得到瞬時表達(dá).(3)凋亡素特異性誘導(dǎo)人卵巢癌細(xì)胞CoC1和CoC1順鉑耐藥亞株CoC1/DDP凋亡,不影響正常卵巢細(xì)胞CHO-K1.(4)凋亡素基因更易誘導(dǎo)CoC1頃鉑耐藥亞株CoC