結(jié)直腸癌血清特異性miRNAs的篩選及其在診斷中的應(yīng)用研究.pdf

1、[目的]
　　 篩選與結(jié)直腸癌密切相關(guān)的miRNAs作為候選標(biāo)志物，驗(yàn)證其在結(jié)直腸癌患者血清及腫瘤組織中的表達(dá)特征，評價血清中候選miRNAs表達(dá)對于結(jié)直腸癌診斷的特異性和敏感性，為血清miRNAs應(yīng)用于結(jié)直腸癌的無創(chuàng)診斷提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 [方法]
　　 1.利用在線疾病-基因庫OMIM檢索與結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展相關(guān)的基因，通過在線miRNAs預(yù)測軟件TargetScan及相關(guān)文獻(xiàn)檢索，篩選5個可能參與調(diào)控結(jié)直腸

2、癌相關(guān)基因的miRNAs分子，作為候選分子標(biāo)志物。
　　 2.建立基于stem-loop RT實(shí)時熒光定量PCR技術(shù)的miRNAs檢測平臺，確定最佳的miRNAs標(biāo)準(zhǔn)化分析方法。
　　 3.采用實(shí)時熒光定量PCR技術(shù)對12例結(jié)直腸癌與癌旁組織、50例結(jié)直腸癌患者及27例正常對照血清中候選miRNAs的表達(dá)水平進(jìn)行檢測;分析血清與腫瘤組織中miRNAs表達(dá)的相關(guān)性，探討結(jié)直腸癌血清中miRNAs的表達(dá)特點(diǎn)及其與臨床、病理特

3、征的關(guān)系，ROC分析方法評價血清miRNAs表達(dá)對結(jié)直腸癌診斷的靈敏度和特異性。
　　 [結(jié)果]
　　 1.結(jié)合生物信息學(xué)分析及文獻(xiàn)檢索，初步選定mir-16、mir-21、mir-29a、mir-92a、mir-143作為結(jié)直腸癌特異性miRNAs候選標(biāo)志物。
　　 2.mir-16、mir-21、mir-92a在結(jié)直腸癌組織和患者血清中表達(dá)水平明顯高于正常對照(P＜0.05)，mir-29a、mir-143在

4、腫瘤組織和患者血清中表達(dá)水平均無明顯改變(P＞0.05)，結(jié)直腸癌組織和血清中miRNAs的表達(dá)趨勢具有一致性。
　　 3.血清mir-16、mir-21、mir-92a在腫瘤發(fā)生的不同部位(結(jié)腸、直腸)、不同病理分化程度(低分化、中分化)及有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況下的表達(dá)水平均無顯著性差異(P＞0.05);結(jié)直腸癌患者血清mir-16、mir-92a在腫瘤切除術(shù)后7天表達(dá)水平明顯下降(P＜0.05)，術(shù)后血清mir-21表達(dá)水平無顯

5、著變化(P＞0.05)。
　　 4.ROC曲線分析結(jié)果顯示，血清mir-16、mir-21及mir-92a的曲線下面積(AUC)分別為0.835、0.691、0.796，血清mir-16對結(jié)直腸癌的診斷價值最高;若以其約登指數(shù)最大時的表達(dá)水平作為診斷臨界值，血清mir-16、mir-21及mir-92a對結(jié)直腸癌診斷的敏感度分別為72％、94％、76％，特異性分別為85％、44％、58％，3個miRNAs聯(lián)合診斷的敏感度和特異性

6、分別為88％和85％。
　　 [結(jié)論]
　　 mir-16、mir-21、mir-92a在結(jié)直腸癌組織與血清中表達(dá)水平明顯升高，血清和組織中miRNAs表達(dá)趨勢一致，術(shù)后檢測血清mir-16和mir-92a表達(dá)水平變化有助于病情監(jiān)測和預(yù)后評估。血清mir-16對結(jié)直腸癌診斷的特異性較好，而mir-21則是靈敏度較好的指標(biāo);mir-16、mir-21、mir-92a聯(lián)合檢測對結(jié)直腸癌的診斷具有良好的靈敏度和特異性，有望作為