AdFOXM1shRNA在鼻咽癌和乳腺癌基因治療中的療效分析.pdf

1、癌癥是21世紀(jì)困擾人類(lèi)的難題之一，給人類(lèi)健康和生命安全帶來(lái)嚴(yán)重威脅。其中，鼻咽癌是中國(guó)南方和東南亞最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，每年大約十萬(wàn)人中就有20例鼻咽癌發(fā)生，其發(fā)病率和死亡率均居頭頸惡性腫瘤首位。乳腺癌是女性排名第一的常見(jiàn)惡性腫瘤，是導(dǎo)致女性死亡的重要原因，且發(fā)病率呈逐年上升的趨勢(shì)，成為全球公共衛(wèi)生的一大難題。由于傳統(tǒng)的治療癌癥的方法如化療，放療存在毒副作用等嚴(yán)重缺陷，尋找癌癥治療的新方法和新靶點(diǎn)已成為近年來(lái)的研究熱點(diǎn)。
　　

2、FOXM1屬于Forkhead Box轉(zhuǎn)錄因子家族，參與調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、細(xì)胞衰老、DNA損傷修復(fù)、器官形成等很多重要的生理過(guò)程。大量文獻(xiàn)表明FOXM1在多種人類(lèi)惡性腫瘤中都有過(guò)表達(dá)的現(xiàn)象，其中包括乳腺癌，但是FOXM1在鼻咽癌中的作用還未見(jiàn)文章報(bào)道。本文中我們研究發(fā)現(xiàn)FOXM1在鼻咽癌組織和細(xì)胞株，以及乳腺導(dǎo)管癌組織和細(xì)胞株中均存在高水平的表達(dá)。另外，有研究發(fā)現(xiàn)FOXM1在維持腫瘤細(xì)胞的增殖、分化、凋亡和轉(zhuǎn)移的平衡方面扮演了重要的角色。這

3、些證據(jù)預(yù)示著FOXM1有可能成為抗腫瘤新方法的靶標(biāo)。
　　 腺病毒是目前基因治療的主要載體，具有宿主范圍廣、感染效率高、滴度高、安全性好，能容納大片段的外源DNA等優(yōu)點(diǎn)。RNA干擾是基因治療中常用的分子工具之一，然而小分子干擾RNA導(dǎo)入靶細(xì)胞的效率高低是其成功應(yīng)用的關(guān)鍵。為了解決這一問(wèn)題，本課題中我們構(gòu)建了一個(gè)腺病毒介導(dǎo)的shRNA表達(dá)系統(tǒng)，命名為AdFOXM1shRNA，用以在腫瘤細(xì)胞中特異性的干擾FOXM1的表達(dá)，進(jìn)而研究該

4、載體在鼻咽癌和乳腺癌基因治療中的初步的療效分析。通過(guò)實(shí)驗(yàn)，我們得到了以下結(jié)果。
　　 首先，摸索本研究所選擇的三株細(xì)胞中合適的病毒使用劑量，這三株細(xì)胞分別是鼻咽癌細(xì)胞CNE以及乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231和ZR-75-30。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)用10 pfu/cell的對(duì)照病毒AdLacZ感染這三株細(xì)胞都幾乎能達(dá)到100％的感染效率。并且，實(shí)驗(yàn)證明在該劑量下我們所構(gòu)建的AdFOXM1shRNA載體能夠非常有效的干擾鼻咽癌和乳腺癌細(xì)胞中FO

5、XM1的表達(dá)。
　　 接著，我們考察了干擾FOXM1的表達(dá)對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖能力的影響。與預(yù)期的一樣，鼻咽癌細(xì)胞CNE和乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231，ZR-75-30感染AdFOXM1shRNA后，由于FOXM1的表達(dá)下降，細(xì)胞周期相關(guān)基因的表達(dá)也隨之下降，細(xì)胞周期被阻斷，細(xì)胞的增殖能力被嚴(yán)重抑制。
　　 然后，我們檢驗(yàn)了FOXM1在腫瘤的發(fā)生過(guò)程中是否起作用。通過(guò)軟瓊脂克隆形成實(shí)驗(yàn)我們看到，感染AdFOXM1shRNA的

6、鼻咽癌細(xì)胞CNE和乳腺癌細(xì)胞ZR-75-30的克隆形成率大大降低，細(xì)胞的非貼壁依賴(lài)性生長(zhǎng)的能力被抑制;而動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的結(jié)果顯示，F(xiàn)OXM1的缺失降低了乳腺癌細(xì)胞ZR-75-30生成腫瘤的能力。兩組實(shí)驗(yàn)分別在體外和體內(nèi)證實(shí)了腫瘤的發(fā)生有賴(lài)于FOXM1的存在。
　　 最后，我們通過(guò)建立裸鼠移植瘤模型考察了FOXM1對(duì)腫瘤生長(zhǎng)的影響。鼻咽癌和乳腺癌的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果表明，瘤內(nèi)注射AdFOXM1shRNA能夠降低腫瘤組織中FOXM1的表達(dá)水平