ERCC1和XPD表達(dá)與細(xì)胞核形態(tài)圖像分析預(yù)示進(jìn)展期上皮性卵巢癌初次鉑類化療反應(yīng)的研究.pdf

1、一.研究背景和目的 上皮性卵巢癌(epithelialovariancancer,EOC)是致死率最高的婦科惡性腫瘤。多數(shù)卵巢癌在初次診斷時(shí)居進(jìn)展期，其標(biāo)準(zhǔn)治療手段為初次細(xì)胞減滅術(shù)后輔以鉑類為基礎(chǔ)的聯(lián)合化療。目前，進(jìn)展期卵巢癌初次治療的有效率可高達(dá)70-80％，但多數(shù)患者在初次治療后2-3年復(fù)發(fā)，并最后因復(fù)發(fā)耐藥而死亡，因此藥物耐受是改善卵巢癌長期生存的主要障礙。 鉑類包括順鉑和碳鉑等，作用機(jī)制為與DNA形成鉸鏈，鉑導(dǎo)致的DN

2、A損害通常是通過核苷酸剪切修復(fù)途徑(nucleotideexcisionrepair，NER)而修復(fù)，已有研究提示NER表達(dá)異常與鉑類藥物耐受有關(guān)。但卵巢惡性腫瘤是一組織異源性很大的腫瘤，不同上皮性卵巢癌對藥物的反應(yīng)性不同，在卵巢癌中有關(guān)NER表達(dá)異常與治療敏感性的研究較少。本研究選擇化療反應(yīng)不同的漿液性和透明細(xì)胞卵巢癌為研究對象，研究臨床藥物敏感性、組織類型不同和化療前后的卵巢癌組織中ERCC1和XPD的表達(dá)情況及細(xì)胞核形態(tài)圖像定量分

3、析，旨在為臨床克服和預(yù)示鉑耐受提供研究。 二.資料和方法 1.研究對象：浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬婦產(chǎn)科醫(yī)院1998-2004年住院接受初次手術(shù)治療并經(jīng)病理診斷為漿液性卵巢癌或透明細(xì)胞癌的晚期卵巢癌患者(≥Ⅲ期)，所有入選病例按計(jì)劃完成以鉑類為基礎(chǔ)的聯(lián)合化療達(dá)6個(gè)療程以上。 2.研究方法：2.1試劑和儀器：ERCC1鼠抗人單克隆抗體：DBS公司抗鼠二抗SP超敏試劑盒：Maixin公司XPD兔抗人多克隆抗體[TFⅡHp8(H-1

4、50)]：SantaCruz生物技術(shù)公司抗兔二抗SP超敏試劑盒：Maixin公司磷酸鹽(PBS)緩沖液：Maixin公司枸掾酸鈉修復(fù)液：Maixin公司DAB試劑盒：DAKO公司HPIAS-1000高清晰度彩色病理圖文報(bào)告分析系統(tǒng)(同濟(jì)醫(yī)科大學(xué)清屏影像公司) 試劑：偏重亞硫酸氫鈉、堿性品紅、活性碳均由上海試劑廠第三分廠生產(chǎn)。 2.2臨床資料復(fù)習(xí)病例檔案和病理切片，記錄以下臨床和病理參數(shù)：2.2.1年齡和絕經(jīng)狀態(tài)：漿液性卵

5、巢癌組：年齡分布24-64歲，平均年齡為49.0歲。未絕經(jīng)41例，已絕經(jīng)22例。透明細(xì)胞癌組：年齡分布37-68歲，平均年齡為52.0歲。 2.2.2組織類型和病理分級：漿液性卵巢癌組63例，其中高分化，中分化和低分化分別為5、25和33例。透明細(xì)胞癌組15例，其中單純性5例，混合性10例。 22.2.3手術(shù)減滅結(jié)果和化療方案：漿液性卵巢癌以手術(shù)后＜2cm病灶為標(biāo)準(zhǔn)，理想手術(shù)26例，非理想手術(shù)37例。接受鉑類+環(huán)磷酰胺化

6、療39例，鉑類+泰素24例，其中順鉑36例，碳鉑27例。順鉑劑量75mg/m2，碳鉑劑量AUC5，泰素劑量175mg/m2?；熼g隔21天。 2.2.4化療療效評價(jià)及分組：化療近期療效以1979年WHO標(biāo)準(zhǔn)將化療療效分為完全緩解(CR)，部分緩解(PR)，微小反應(yīng)(MR)，穩(wěn)定(SD)和進(jìn)展(PD)。以Freitas等[4]的標(biāo)準(zhǔn)評定化療療效的敏感和耐藥。根據(jù)該標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分組：漿液性卵巢癌組化療敏感36例，耐藥27例；其中13例進(jìn)

7、行新輔助化療，獲得化療前、后組織；透明細(xì)胞癌化療敏感8例，耐藥7例。 2.3上皮性卵巢癌ERCC1和XPD蛋白表達(dá)：2.3.1組織標(biāo)本：分漿液性卵巢癌，漿液性卵巢癌新輔助化療+間隔手術(shù)和透明細(xì)胞癌組織。 2.3.2免疫組化方法：用Envision二步法顯示ERCC1、XPD的表達(dá)水平。采用免疫組化定量分析H-SCORE：∑p(i+1)進(jìn)行計(jì)分。 2.4細(xì)胞核形態(tài)圖像定量分析Feulgen's染色切片置于HPIAS

8、-1000高清晰度彩色病理圖文報(bào)告分析系統(tǒng)40×10倍視野下，采集細(xì)胞核圖像，規(guī)定所選擇的細(xì)胞核清晰可見，核膜、染色質(zhì)完整，無人工因素變形，然后進(jìn)行細(xì)胞核面積、周長、形態(tài)因子、異形指數(shù)、等效直徑、細(xì)胞核的光密度測量得出分?jǐn)?shù)，總共5個(gè)視野，取其均數(shù)，確定為其測量值。 2.5統(tǒng)計(jì)方法：(1)所有數(shù)據(jù)分為計(jì)數(shù)資料和計(jì)量資料，計(jì)數(shù)資料之間比較采用卡方檢驗(yàn)。計(jì)量資料結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，根據(jù)數(shù)據(jù)分布的結(jié)果，正態(tài)分布多組間的比較采用單因素

9、方差分析(onewayANOVA)，非正態(tài)分布采用Kruskal-WallisH檢驗(yàn)；正態(tài)分布兩組間比較采用兩獨(dú)立樣本T檢驗(yàn)，非正態(tài)分布采用Mann-WhitneyU檢驗(yàn)，方差不齊的數(shù)據(jù)用修正T檢驗(yàn)。 (2)均為雙側(cè)檢驗(yàn)，以P＜0.05判斷具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 (3)雙變量的相關(guān)分析用spearman等級相關(guān)分析。 (4)兩類之間多變量分析采用二項(xiàng)邏輯回歸分析，確定各變量的重要性。 所有數(shù)據(jù)均納入SPSS11

10、.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。 三.結(jié)果 1.上皮性卵巢癌ERCC1和XPD蛋白表達(dá)、細(xì)胞核形態(tài)分級與臨床病理參數(shù)的關(guān)系 1.1ERCC1和XPD蛋白表達(dá)免疫組化定位均在細(xì)胞核，ERCC1平均表達(dá)率為39.7％，平均計(jì)數(shù)得分為2.22；XPD平均表達(dá)率為35.9％，平均計(jì)數(shù)得分為2.21. 1.2非理想減滅術(shù)患者ERCC1和XPD蛋白表達(dá)高于理想減滅手術(shù)患者，其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 1.3漿液性卵巢癌中50歲以下

11、、絕經(jīng)前患者核面積及異形指數(shù)較大，化療中鉑類+泰素組較鉑類+環(huán)磷酰胺組平均光密度高，碳鉑組較順鉑組平均光密度高、核周長長。 1.4上皮性卵巢癌中透明細(xì)胞癌ERCC1和XPD蛋白表達(dá)高于卵巢漿液性癌。 2.漿液性卵巢癌ERCC1和XPD蛋白表達(dá)與化療反應(yīng)關(guān)系 2.1漿液性卵巢癌耐藥組ERCC1和XPD蛋白表達(dá)高于敏感組，其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 2.2新輔助化療后較化療前組織ERCC1和XPD蛋白表達(dá)上調(diào)，其差

12、異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 3.漿液性卵巢癌中細(xì)胞核面積、細(xì)胞核周長耐藥組較敏感組大，其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 4.臨床病理參數(shù)，ERCC1和XPD蛋白和核形態(tài)圖像分析與化療反應(yīng)關(guān)系分析 44.1ERCC1和XPD蛋白表達(dá)率存在相關(guān)，r=0.669，p=0.000；ERCC1表達(dá)率和細(xì)胞核面積存在相關(guān)，r=0.257，p=0.042；ERCC1表達(dá)率和細(xì)胞核周長存在相關(guān)，r=0.283，p=0.025；細(xì)胞核面積和細(xì)胞核周長存

13、在相關(guān)，r=0.894，p=0.000。 4.2漿液性卵巢癌中對化療敏感和耐藥之間的判別分析，綜合了臨床病理參數(shù)、ERCC1、XPD蛋白和細(xì)胞核形態(tài)圖像分析各參數(shù)，統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)ERCC1、XPD、核面積、核周長、手術(shù)減滅效果兩類不同化療反應(yīng)間的差異具有顯著性意義；其中ERCC1蛋白、核面積為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的獨(dú)立參數(shù)，對鉑類耐藥性的判斷意義較大。 四.結(jié)論 1.ERCC1和XPD蛋白表達(dá)在透明細(xì)胞癌高于漿液性卵巢癌，臨床化療