川崎病PBMCs核因子-κB的活化及白細(xì)胞介素-8的研究.pdf

1、目的 探討小兒川崎病(KD)外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMCs)核因子-κB(NF-κB)的活化和相應(yīng)炎癥因子白細(xì)胞介素-8(IL-8)的表達(dá)及二者與KD發(fā)病之間的關(guān)系。 方法 (1)PBMCs的體外活化培養(yǎng)：采用密度梯度離心法無(wú)菌分離各受試對(duì)象PBMCs共40例(其中川崎病22例，正常對(duì)照者18例)；用含10％胎牛血清的RPMIl640調(diào)細(xì)胞濃度為10<’6>／ml，接種于24孔培養(yǎng)板內(nèi)，每孔lml，編為3組，第一組為空白對(duì)照即

2、自然培養(yǎng)，第二組加入終濃度為20nmol／L的12-肉豆蔻酰-13-乙酸佛波脂(PMA)，第三組加入同樣濃度PMA的同時(shí)加入終濃度為100μmol／L的NF-κB抑制劑四氫化吡咯二硫代氨基甲酸脂(PDTC)，在37℃、5％C0<，2>及相對(duì)濕度為95％的培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)lh；(2)將培養(yǎng)1h的PBMCs涂片，4％多聚甲醛室溫下固定30min，同時(shí)留取各組細(xì)胞培養(yǎng)上清液；(3)免疫細(xì)胞化學(xué)方法檢測(cè)各組PBMCs NF-κB的活化，雙抗體夾心酶

3、聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清液中IL-8的含量。 結(jié)果 (1)PBMCs NF-κB的活化及IL-8的表達(dá)：①免疫細(xì)胞化學(xué)染色可見(jiàn)胞核和胞漿都有陽(yáng)性著色，以胞核為主；②在自然培養(yǎng)情況下，對(duì)照(Contro1)組和KD組PBMCs均可出現(xiàn)一定量NF-κB活化，其培養(yǎng)上清液中亦有少量IL-8表達(dá)，KD組(15.19±4.99％、331.82±385.20pg/ml)顯著高于Control組(4.71±2.70％、76

4、.42±41.46pg／m1)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p=O.000)；③加入PMA培養(yǎng)后，兩組的PBMCsNF-κB活化細(xì)胞百分比均升高，同時(shí)細(xì)胞培養(yǎng)上清液中IL-8的表達(dá)量也明顯升高，KD組(36.79±8.69％、946.17±669.62pg／ml仍明顯高于Control組(10.22+5.70％、149.58±101.99／ml)(p=0.000)，與自然培養(yǎng)組(15.19+4.99％、331.82±385.20 pg／m1)比較

5、差異也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p=O.000)；④給予NF-κB特異性抑制劑PDTC干預(yù)后，可見(jiàn)其對(duì)PMA刺激的PBMCs NF-rκB活化有明顯的抑制作用，相應(yīng)的PB：MCs培養(yǎng)上清液中IL一8的含量隨之降低，但KD組(18.24±724％、415.21±368.12 pg/ml)仍明顯高于Control組(5.324±3.12％、95.774±41.68 pedml)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p=0.000)；與自然培養(yǎng)組相比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p

6、=0.157)。(2)NF-KB與IL-8的相關(guān)性：PBMCs培養(yǎng)上清液中IL-8的表達(dá)與PBMCs NF-κB的活性變化相一致，兩者呈正的直線相關(guān)，Person相關(guān)系數(shù)r=0.566(P<0.01)。(3)NF-KB及IL-8與KD冠狀動(dòng)脈損害之間的關(guān)系：各組內(nèi)有冠狀動(dòng)脈損害與無(wú)冠狀動(dòng)脈損害比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p>0.05)。 結(jié)論 (1)急性期KD患兒PBMCs NF-KB活化明顯增強(qiáng)，其作為誘導(dǎo)多種炎性細(xì)胞因子如IL