白細(xì)胞介素-24體外誘導(dǎo)成人急性白血病骨髓單個(gè)核細(xì)胞凋亡的研究.pdf

1、目的：明確IL-24對(duì)體外培養(yǎng)的白血病骨髓單個(gè)核細(xì)胞（BMMNC）增殖和凋亡的影響，初步探討IL-24誘導(dǎo)BMMNC凋亡的可能機(jī)制，為臨床白血病的治療提供理論依據(jù)。
　　方法：（1）收集石河子大學(xué)一附院血液科2012年5月至2013年10月門診及住院均未經(jīng)過任何細(xì)胞因子、激素或化學(xué)藥物治療新確診病例骨髓。其中急性白血病組患者30例，包括急性淋巴細(xì)胞白血?。ˋLL）患者15例，急性非淋巴細(xì)胞白血?。ˋNLL）患者15例。正常骨髓15

2、例。人淋巴細(xì)胞分離液/密度梯度離心法分離單個(gè)核細(xì)胞體外培養(yǎng)，調(diào)整細(xì)胞密度至2×106/ml，分別用0、20、50、100ng/ml IL-24處理細(xì)胞，每個(gè)濃度3孔。分別在處理0、24、48、72小時(shí)后收集細(xì)胞。（2）用MTT法和細(xì)胞計(jì)數(shù)法檢測(cè)上述細(xì)胞的增殖情況。（3）用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)上述細(xì)胞的凋亡率。（4）用RT-PCR方法檢測(cè)上述細(xì)胞bcl-2和caspase-3 mRNA的表達(dá)。（5）用瑞氏染色法觀察上述細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化。所得數(shù)據(jù)

3、在Excel中建立數(shù)據(jù)庫，spss17.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　結(jié)果:（1）MTT結(jié)果顯示加藥濃度在0、20、50ng/ml時(shí)，隨著IL-24濃度的增加，成人急性白血病BMMNC增殖抑制率逐漸增強(qiáng)，而當(dāng)IL-24濃度為100ng/ml時(shí)BMMNC抑制率較50ng/ml有所降低。IL-24對(duì)成人急性白血病BMMNC影響也有時(shí)間依賴性，在0、24、48h時(shí)其增殖抑制率隨時(shí)間增加逐漸升高，但在72h時(shí)其增殖抑制率反而較48h時(shí)有所降低。

4、加藥48h時(shí)相比其他時(shí)間點(diǎn)，不同濃度的IL-24，細(xì)胞增殖抑制率最強(qiáng)。對(duì)照組BMMNC用不同濃度的IL-24處理后，細(xì)胞增殖抑制率不受影響。細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果與上述結(jié)果相一致。（2）流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果顯示，用0、20、50、100ng/ml IL-24處理48h后，急性白血病骨髓單個(gè)核細(xì)胞的凋亡率的差異有顯著性（P<0.05），并且50ng/ml時(shí)凋亡率最高。對(duì)照組骨髓單個(gè)核細(xì)胞經(jīng)相同處理后，細(xì)胞凋亡率差異無顯著性（P>0.05）。（3）RT

5、-PCR結(jié)果顯示，急性白血病骨髓單個(gè)核細(xì)胞在0、20、50ng/ml IL-24處理48小時(shí)后，BCL-2的表達(dá)強(qiáng)度隨IL-24濃度升高逐漸降低（但100ng/ml時(shí)較50ng/ml時(shí)有所增高）；而Caspase-3表達(dá)強(qiáng)度隨IL-24濃度升高逐漸增強(qiáng)（但100ng/ml時(shí)反而較50ng/ml時(shí)有所降低）。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析急性白血病骨髓單個(gè)核細(xì)胞在加藥不同濃度時(shí)其BCL-2和Caspase-3表達(dá)差異有顯著性。對(duì)照組骨髓單個(gè)核細(xì)胞經(jīng)相同處理

6、后，BCL-2和Caspase-3表達(dá)的差異無顯著性。（4）瑞士染色結(jié)果顯示未發(fā)生凋亡的骨髓單個(gè)核細(xì)胞胞質(zhì)少，細(xì)胞核為圓形，核大。發(fā)生早期凋亡的骨髓單個(gè)核細(xì)胞細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則，細(xì)胞核固縮呈半球形、環(huán)形或月牙形，染色較之未凋亡細(xì)胞加深。
　　結(jié)論：（1）IL-24對(duì)成人急性白血病BMMNC增殖有抑制作用。（2）IL-24能夠促進(jìn)成人急性白血病BMMNC凋亡。（3）IL-24能夠上調(diào)caspase-3 mRNA的表達(dá)，下調(diào)bcl-2 m