冬凌草甲素誘導(dǎo)急性早幼粒白血病細胞凋亡與分化的研究.pdf

1、目的:白血病是嚴重危害人類健康的惡性疾病,尋找誘導(dǎo)白血病細胞凋亡與分化的誘導(dǎo)劑一直是研究的熱點。急性早幼粒細胞白血病(APL)占急性髓系白血病的(AML)5％~8％,95％以上的患者具有特征性染色體t(15;17)(15q22;17q21),形成早幼粒細胞白血病-維甲酸受體α(PML-RARα)融合基因,并表達PML-RARα融合蛋白。本論文分別就高劑量冬凌草甲素誘導(dǎo)APL細胞凋亡及機制和低劑量冬凌草甲素協(xié)同全反式維甲酸(ATRA)誘導(dǎo)

2、白血病細胞分化及機制進行初步研究。
　　方法:常規(guī)培養(yǎng)急性單核性白血病細胞系NB4與NB4-R1細胞,用不同濃度的冬凌草甲素(1-6μg/ml)處理NB4和NB4-R1細胞3d。分別采用苔盼藍染色法檢測細胞存活率、Annexin V-FITC與PI雙染流式細胞術(shù)(FCM)檢測細胞凋亡和細胞周期;利用熒光探針二氯熒光素雙醋酸鹽(DCFH-DA)進行細胞內(nèi)活性氧檢測;通過細胞形態(tài)學(xué)觀察、FCM檢測CD11b表達和NBT還原試驗檢測低劑

3、量冬凌草甲素協(xié)同ATRA誘導(dǎo)白血病細胞的分化作用;采用SDS-PAGE和蛋白印跡(Western Blot)技術(shù)觀察細胞內(nèi)多聚腺苷酸聚合酶[poly(ADP-ribose)polymerase,PARP]的表達,研究高劑量冬凌草甲素誘導(dǎo)APL細胞凋亡及機制以及低劑量冬凌草甲素協(xié)同ATRA誘導(dǎo)白血病細胞分化的分子機制。
　　結(jié)果:發(fā)現(xiàn)冬凌草甲素在凋亡出現(xiàn)之前活性氧(ROS)明顯升高,而ROS阻斷劑NAC抑制冬凌草甲素誘導(dǎo)活性氧的產(chǎn)生

4、,同時也阻斷了冬凌草甲素誘導(dǎo)的凋亡。低劑量冬凌草甲素與低劑量的ATRA都不能誘導(dǎo)NB4、NB4-R1細胞分化,而聯(lián)合用藥不僅能夠誘導(dǎo)ATRA敏感細胞NB4的分化,而且能夠誘導(dǎo)ATRA耐藥細胞NB4-R1的分化。進一步的研究發(fā)現(xiàn),冬凌草甲素能夠增加RARα及RARα的靶基因表達。
　　結(jié)論:高劑量冬凌草甲素觸發(fā)細胞凋亡可能是通過活性氧信號通路實現(xiàn)的。冬凌草甲素能夠抑制ATRA誘導(dǎo)RARα的降解,從而使得冬凌草甲素協(xié)同ATRA的分化作